[發明專利]宮頸部異常細胞檢測用試劑及用該試劑檢測宮頸部異常細胞的方法

無效

• 申請號: 200980130218.6
• 申請日: 2009-07-27
• 公開（公告）號: CN102112875A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發明（設計）人: 森田將且;河合昭典;辻野幸夫
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C12Q1/04;C12Q1/68;G01N33/48;G01N33/483
• 代理公司: 北京市安倫律師事務所 11339
• 代理人: 張小英

技術領域：

本發明提供一種用于檢測從子宮頸部采集的生物試樣中所含如癌細胞或異型細胞等異常細胞的試劑以及使用該試劑檢測采自宮頸部試樣中的異常細胞的方法。

背景技術：

宮頸癌是發生于子宮頸部表面上皮的癌，其大部分為扁平上皮癌。通常在宮頸癌檢查中，首先從宮頸部采集細胞，通過細胞診斷進行篩查，如果發現異常，再進行組織診斷等精密檢查。

在宮頸部的組織診斷中，作為癌前病變期，根據出現在上皮內的異型細胞的出現程度分為輕度、中度或重度三個階段的發育異常。從重度發育異常再惡化，就進入上皮內出現癌細胞階段。然后，再發展為癌細胞局限于上皮層內的“原位癌”和癌細胞從上皮蔓延到皮下組織的“浸潤癌(所謂的宮頸癌)。

進行細胞診斷，即篩查，以判斷是否進行上述組織診斷。此細胞診斷是將采自子宮頸部的生物樣本試樣涂抹在玻片上用顯微鏡等觀察。

在細胞診斷中，需要根據檢查人員的觀察來判斷，若檢測試樣制備不好則有可能看漏宮頸癌，還要依賴于檢查人員的熟練技術，因此很難快速、精確地檢查大量試樣。而且很可能缺乏有熟練技術的檢查人員。

因此，人們嘗試著利用自動化系統檢測從子宮頸部采集的生物試樣中所含的異常細胞，將其作為細胞診斷的補充。

可用于自動化系統的異常細胞檢測方法中，已知有用熒光色素染色細胞核內的DNA，用流式細胞儀測定熒光，算出DNA量，根據算出的DNA量檢測癌細胞。

W.A.Linden等人(非專利文獻1)用溴化乙錠染色采自宮頸部的細胞的DNA，進行熒光測定，檢測癌細胞，還在用溴乙錠染色DNA的同時，用異硫氰酸熒光素(FITC)染色蛋白質，基于DNA量和蛋白質量檢測癌細胞。

B.J.Fowlkes等人(非專利文獻2)則用碘化丙啶(PI)和FITC分別染色細胞核和細胞質，用流式細胞儀測定二種熒光，根據這些熒光的強度檢測癌細胞。

然而，這些方法發生假陽性和假陰性的概率高，在宮頸癌自動化檢測系統上的應用未能實現。

美國專利第4883867號(專利文獻1)中記載了用以下通式染色并檢測網織紅細胞的方法：

[化1]

(式中，X為O、S、Se、N-烷基(碳數1-6)或C(CH₃)_n，R₁為碳數1-6的烷基，R₂為碳數1-6的烷基，R₃為聚合苯、碳數1-6的烷基、甲氧基或不存在，R₄為碳數1-6的烷基、甲氧基或不存在，n為0或1-6的整數。)

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：美國專利第4883867號說明書

非專利文獻

非專利文獻1：W.A.Linden等，組織化學與細胞化學(J.Histochem.Cytochem.)，1979年，Vol.27，p.529-535

非專利文獻2：B.J.Fowlkes等，組織化學與細胞化學(J.Histochem.Cytochem.)，1976年，Vol.24，p.322-331

發明內容：

發明要解決的課題

本發明的課題是提供一種能更敏感地檢出采自子宮頸部的生物試樣中所含異常細胞的試劑以及用該試劑檢測宮頸部異常細胞的方法。

解決課題的方法

本項發明人為了解決上述課題，著眼于以下幾點。

即，一般來說細胞癌變后，細胞核就會出現異常(比如核的大小改變、DNA量增加、染色質凝集等)。因此，本項發明人考慮是否可以根據這些現象區分正常細胞和癌細胞。

本項發明人還發現用以下通式(I)所示化合物或其鹽作為核酸染色色素，可以更靈敏地檢測出宮頸部位的異常細胞，從而可以檢測出這種細胞核的異常，以此完成了此項發明：

[化2]

(式中，X表示S或O，

[化3]

表示

[化4]

R¹和R²相同或不同，表示氫原子或碳數1-6的烷基；

[化5]

表示

[化6]

R³和R⁴相同或不同，表示可以以磺酸基為置換基的、碳原子數1-6的直鏈或支鏈烷基)。

因此，本發明提供一種宮頸部異常細胞檢測用試劑，其包含上述通式(I)的色素，用于檢測含有采自宮頸部的細胞的生物試樣中所含異常細胞。