[發明專利]用于測定角化結構中分析物的非蛋白水解方法

有效

• 申請號: 200980125850.1
• 申請日: 2009-04-29
• 公開（公告）號: CN102077093A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: V·希爾;M·阿特菲;M·I·謝弗
• 申請（專利權）人: 賽凱米迪克斯股份有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東;楊帆

相關申請的交叉引用

本申請要求2008年4月29日提交的美國專利申請第12/111,914號的優先權，其內容通過引用納入本文。

技術領域

本發明涉及用于測定對象的角化結構中一種或多種感興趣分析物的存在和含量的材料和方法，更具體涉及用于上述目的但不需要對所述角化結構進行蛋白水解加工的材料和方法。

背景技術

本發明涉及一種改進的分析方法，它允許較快地釋放和直接分析毛發和其它角化結構如指甲和趾甲中存在的分析物，包括有機分析物，如某些濫用藥物或其代謝物。該方法能夠靈敏地檢測這類分析物，而不影響該分析物的結構，不會對可用于檢測該分析物的分析物探針如抗體、RNA/DNA和生物受體探針產生不利影響。例如，在一些實施方式中，分析物探針可直接加入懷疑含有一種或多種分析物且經過本文所述處理的角化結構中。可以此方式評價所述一種或多種分析物的種類以及對象消耗所述一種或多種分析物的程度和持續時間。

在感興趣分析物的檢測中，與尿液、血液或口腔液體的分析技術相比，分析毛發和其它角化結構有某些優勢。這些優勢包括容易處理和儲存、檢測窗寬以及藥物的存在和含量與使用時間和攝入劑量相關聯。尿液、血液和口腔液體技術的已知缺點包括無法確定使用或接觸的持續時間和強度。這些技術至多提供有關攝入分析物的短期信息。此外，解釋這些結果時也有問題。例如，在尿液中檢測到低水平的攝入藥物或藥物代謝物可能表明對象最近攝入少量這種藥物或幾天前攝入較大量的這種藥物。因此，在不重復檢測的情況下，使用這些方法無法測定長期藥物使用。

在對建立用于測定感興趣分析物的持續時間和強度的精確可靠方法的問題的回應中，Werner?A.Baumgartner博士進行的工作(參見“用于測定阿片類濫用歷史的毛發的放射性免疫試驗”(Radioimmunoassay?of?Hair?for?Determining?Opiate?Abuse?Histories)，J.Nucl?Med?20：749-752(1979))確定可通過分析哺乳動物體毛獲得接觸濫用藥物的長期歷史，因為在纖維合成期間這些物質被“嵌入”個體毛發纖維中。在這個方面，毛發能夠像錄音帶那樣工作，即可通過對毛發樣品進行區塊分析評價過往接觸史。例如，曾發現一旦血流中出現嗎啡，則會發現其隨著毛發的合成進入毛發中。

經測定，各種化學物質，包括濫用藥物均能夠在毛發合成過程中俘獲在毛發中；這些物質主要在軀體上存在毛發的時間“鎖定”在毛發中。在頭發和體毛，以及其它角化結構如指甲中發現這種現象；參見Suzuki等，Forensic?Sci.International，24：9-16，1984。這些俘獲的物質無法從毛發中洗出，曾認為只有在完全或接近完全破壞毛發纖維時才能完全釋放這些物質。

以前從毛發中提取分析物的方法包括將毛發加入熱的甲醇溶液中，或者在堿性或酸性介質中孵育毛發數小時(通常過夜)；Yegles，等，刊于：《在毛發中進行藥物測試的分析和實踐方法》(Analytical?and?Practical?Aspects?of?Drug?Testing?in?Hair)，CRC出版社，2007，第73-94頁；Jurado，C.刊于：《在毛發中進行藥物測試的分析和實踐方法》，CRC出版社，2007，第95-125頁；Cheze，M.等，刊于：《在毛發中進行藥物測試的分析和實踐方法》，CRC出版社，2007，第163-185頁)。現有方法也包括使用超聲波或杵臼和溶劑溶劑輔助提取。

在精確測定攝入分析物的存在和含量時，溶劑提取方法可能存在以下幾個問題。這些問題之一是溶劑提取方法常常只去除毛發樣品所含全部分析物中未知和可變的一小部分。另一缺點是不同分析物可能需要不同溶劑或不同時間和溫度進行提取。此外，在免疫試驗分析中，需要蒸發溶劑，許多溶劑是有毒有害的。

其它現有方法采用蛋白水解和還原性處理的組合來完全消化和降低角化結構，以便釋放一種或多種分析物。參見例如，美國專利5,466,579；5,324,642；6,022,693；6,582,924；和6,949,344，通過引用將其全文納入本文，這些文獻提供了用于篩選和驗證感興趣分析物的實驗的示范性檢測方法，包括免疫試驗方法，例如放射性免疫試驗和酶促免疫試驗方法的示范性檢測方法。這類合并的蛋白水解和還原性處理方法雖然有效，但由于使用蛋白水解酶使得成本相當高，這也會干擾通過蛋白水解切割分析物檢測探針如抗體進行的后續分析物檢測實驗，從而阻止某些高度靈敏的分析技術的應用或者需要在中間使用蛋白酶中和、分離或純化步驟。