[發明專利]具有阿魏酸酯酶活性的多肽和編碼該多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 200980122411.5
• 申請日: 2009-04-17
• 公開（公告）號: CN102066409A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 克里斯特爾·T·喬根森;瑪麗·斯特林格;伊娃·H·漢森;多米尼克·A·斯科夫倫德;克里斯琴·B·R·M·克羅格
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C07K14/38
• 分類號: C07K14/38;C12N15/31;C12N9/16
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

1.一種具有阿魏酸酯酶活性的分離的多肽，選自下組：

(a)多肽，其包含與SEQ?ID?NO：2的成熟多肽具有至少60％同一性的氨基酸序列；

(b)由如下多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸在至少中等嚴緊條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列，(ii)包含SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列的基因組DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈；

(c)由如下多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含與SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和

(d)包含取代、缺失和/或插入一個或多個(幾個)氨基酸的SEQ?ID?NO：2的成熟多肽的變體。

2.權利要求1的多肽，其由如下多核苷酸編碼，所述多核苷酸在至少中等嚴緊條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列；(ii)包含SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列的基因組DNA序列；或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈。

3.權利要求1或2的多肽，其由如下多核苷酸編碼，所述多核苷酸包含SEQ?ID?NO：1的核苷酸序列或其編碼具有阿魏酸酯酶活性的片段的亞序列，或由SEQ?ID?NO：1的核苷酸序列或其編碼具有阿魏酸酯酶活性的片段的亞序列組成。

4.權利要求1到3任一項所述的多肽，其由如下多核苷酸編碼：所述多核苷酸包含SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列，或由SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列組成。

5.權利要求1到4任一項所述的多肽，其中所述多肽是變體，所述變體包含取代、缺失和/或插入一個或多個(幾個)氨基酸的SEQ?ID?NO：2的成熟多肽。

6.權利要求1到5任一項所述的多肽，其中所述成熟多肽是SEQ?ID?NO：2的氨基酸1到249。

7.權利要求1到6任一項所述的多肽，其中所述成熟多肽編碼序列是SEQ?ID?NO：1的核苷酸152到901。

8.一種分離的多核苷酸，包含編碼權利要求1到7任一項所述的多肽的核苷酸序列。

9.權利要求8的分離的多核苷酸，在SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列中包含至少一個突變，其中所述突變體核苷酸序列編碼SEQ?ID?NO：2的成熟多肽。

10.一種核酸構建體，包含權利要求8或9的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地連接于一個或多個調控序列，所述調控序列在表達宿主中指導多肽的產生。

11.一種重組表達載體，包含權利要求10的核酸構建體。

12.一種重組宿主細胞，包含權利要求10的核酸構建體。

13.權利要求12的重組宿主細胞，所述宿主細胞為真菌或細菌宿主細胞。

14.一種產生權利要求1到7任一項所述的多肽的方法，包括：(a)在有益于所述多肽產生的條件下培養細胞，所述細胞以其野生型的形式產生所述多肽；和(b)回收所述多肽。

15.一種產生權利要求1到7任一項所述的多肽的方法，包括：(a)在有益于所述多肽產生的條件下培養宿主細胞，其包括核酸構建體，所述核酸構建體包含編碼所述多肽的核苷酸序列；和(b)回收所述多肽。

16.一種產生包含突變體核苷酸序列的多核苷酸的方法，所述突變體核苷酸序列編碼具有阿魏酸酯酶活性的多肽，所述方法包括：(a)在SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列中引入至少一個突變，其中所述突變體核苷酸序列編碼多肽，所述多肽包含SEQ?ID?NO：2的成熟多肽或由SEQ?ID?NO：2的成熟多肽組成；和(b)回收所述包含突變體核苷酸序列的多核苷酸。

17.通過權利要求16的方法產生的突變體多核苷酸。

18.一種產生多肽的方法，包括：(a)在有益于產生所述多肽的條件下培養細胞，所述細胞包含權利要求16的突變體多核苷酸，所述多核苷酸編碼所述多肽；和(b)回收所述多肽。