[發(fā)明專利]通過RNA干擾引入復(fù)能基因而重編程細(xì)胞

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980121404.3
• 申請日: 2009-04-07
• 公開（公告）號: CN102083982A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: K·J·埃勒特森;瑞秋·A·帕沃爾;瓊·S·瑞姆
• 申請（專利權(quán)）人: 紐珀滕索有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N5/10
• 代理公司: 北京安信方達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 崔建麗;鄭霞

1.一種重編程細(xì)胞的方法，所述方法包括：將細(xì)胞暴露于干擾編碼調(diào)節(jié)蛋白的基因表達的shRNA構(gòu)建體；誘導(dǎo)復(fù)能基因的表達；以及選擇細(xì)胞，其中所述細(xì)胞已恢復(fù)分化潛能。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇所述細(xì)胞包括：比較所述細(xì)胞暴露于所述shRNA構(gòu)建體之前和之后的表型，以及鑒定具有與恢復(fù)的分化潛能一致的表型的細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括：將選擇的細(xì)胞擴增為細(xì)胞群。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇細(xì)胞包括：使用針對于由復(fù)能基因編碼的蛋白的抗體或針對于細(xì)胞表面標(biāo)記物的抗體分離細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞表面標(biāo)記物選自由下列組成的組：SSEA3、SSEA4、Tra-1-60和Tra-1-81。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括：在選擇所述細(xì)胞之前，比較暴露于所述shRNA構(gòu)建體之前所述復(fù)能基因的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與暴露于shRNA構(gòu)建體之后所獲得的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述基因編碼選自由下列組成的組的調(diào)節(jié)蛋白：DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、組蛋白脫乙酰酶、賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、組蛋白脫甲基酶、賴氨酸脫甲基酶、sirtuin、甲基結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白、組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述復(fù)能基因選自由下列組成的組：Oct-4、Sox-2和Nanog。

9.一種重編程細(xì)胞的方法，所述方法包括：將具有第一轉(zhuǎn)錄模式的細(xì)胞暴露于小分子抑制劑；誘導(dǎo)復(fù)能基因的表達；比較細(xì)胞的所述第一轉(zhuǎn)錄模式與暴露于所述抑制劑之后所獲得的轉(zhuǎn)錄模式；以及選擇細(xì)胞，其中所述細(xì)胞已恢復(fù)分化潛能。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中暴露于所述抑制劑之后的所述轉(zhuǎn)錄模式與從胚胎干細(xì)胞分析的基因的轉(zhuǎn)錄模式至少50％相似。

11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中在比較轉(zhuǎn)錄模式之前，比較所述細(xì)胞暴露于所述shRNA構(gòu)建體之前和之后的表型。

12.如權(quán)利要求9所述的方法，所述方法還包括：將選擇的細(xì)胞擴增為細(xì)胞群。

13.如權(quán)利要求9所述的方法，其中選擇所述細(xì)胞包括：使用針對于由復(fù)能基因編碼的蛋白的抗體或針對于復(fù)能標(biāo)記物的抗體分離細(xì)胞。

14.如權(quán)利要求9所述的方法，其中選擇所述細(xì)胞包括：使用報道分子或?qū)x擇標(biāo)記物的抗性分離細(xì)胞。

15.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述復(fù)能基因選自由下列組成的組：Oct-4、Sox-2和Nanog。

16.一種富集的重編程的細(xì)胞群，所述重編程的細(xì)胞群根據(jù)包括下列步驟的方法制備：將細(xì)胞暴露于干擾編碼調(diào)節(jié)蛋白的基因表達的shRNA構(gòu)建體；誘導(dǎo)復(fù)能基因的表達；以及選擇細(xì)胞，其中所述細(xì)胞已恢復(fù)分化潛能。

17.如權(quán)利要求16所述的富集的重編程的細(xì)胞群，其中所述重編程的細(xì)胞表達選自由下列組成的組的細(xì)胞表面標(biāo)記物：SSEA3、SSEA4、Tra-1-60和Tra-1-81。

18.如權(quán)利要求16所述的富集的重編程的細(xì)胞群，其中所述復(fù)能基因選自由下列組成的組：Oct-4、Nanog和Sox-2。

19.如權(quán)利要求16所述的富集的重編程的細(xì)胞群，其中所述重編程的細(xì)胞占所述群的至少60％。