[發(fā)明專利]家族44木葡聚糖酶變體有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200980121086.0 | 申請日： | 2009-06-04 |
| 公開（公告）號： | CN102057042A | 公開（公告）日： | 2011-05-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 沃納·貝森馬特;艾斯本·P·弗里伊斯;基思·吉布森;弗蘭克·W·拉斯馬森;邁克爾·斯克喬特 | 申請（專利權(quán)）人： | 諾維信公司 |
| 主分類號： | C12N9/42 | 分類號： | C12N9/42;C12N15/56;C12N1/15;C12N1/21;C11D3/386 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105 | 代理人： | 史悅 |
| 地址： | 丹麥*** | 國省代碼： | 丹麥;DK |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 家族 44 聚糖 變體 | ||
1.一種親本木葡聚糖酶的分離的變體，所述變體在所述親本木葡聚糖酶一個或多個選自下組位置編號的位置包含改變：68、123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、366、1、374、7、140、8、14、21、211、37、45、13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、139、268、142、159、164、102、168、176、180、482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、2、240、244、5、247、249、328、252、259、406、267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、18、302、165、80、303、316、169、322、120、146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、389、391、10、392、396、177、397、399、409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、225、450、454、3、455、456、299、461、470、204、476、488、347和507，所述位置對應(yīng)于氨基酸序列SEQ?ID?NO：3中的位置，且其中
a)所述改變?yōu)?/p>
i)在占據(jù)所述位置的氨基酸下游插入氨基酸，和/或
ii)缺失占據(jù)所述位置的氨基酸，和/或
iii)用不同的氨基酸取代占據(jù)所述位置的氨基酸；
b)所述親本木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶；和
c)所述變體具有木葡聚糖酶活性。
2.權(quán)利要求1的變體，其中所述親本木葡聚糖酶選自下組：SEQ?IDNO：3、SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：7，或所述親本木葡聚糖酶選自與SEQ?IDNO：3的氨基酸序列具有至少75％同一性的木葡聚糖酶。
3.權(quán)利要求1或2的變體，其中所述變體包含一種或多種下述的改變組合：
V1*+V2*+H3*；
V1Q+*1aE+*1bV；
H3A；
H3A+H436A；
K8A，Q，S；
T9D；
T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T；
I10V+D33E+M40L+A41T+Q67M+Y73F+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+T374A+S416A+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；
I10V+F17S+D33E+M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+V219A+D249N+V272A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+K470T+I473S+V477I；
I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+H164N+N168K+T172A+V219A+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+V272A+I337L+M356L+T374A+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+D33E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+N168K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473S+V477I+E489A+A490V+T517A+S522*；
I10V+F17S+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+T320A+I337L+M356L+T374A+V397A+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473S+V477I+T517A+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T104A+Q137E+N153K+R156Q+V219A+1222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+N415S+D420G+T421I+S424H+N441D+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；
I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+T104A+Q137E+R156Q+V159A+H164N+N168K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A；
I10V+F17S+Y53H+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+T172V+A177T+I222V+V228I+D249N+S269N+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；
K13A+K129A；
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P；
K13A，R；
K18R；
R20A；
K21Q+K129A；
K21Q，R，T；
Q32H+M40L+R49G+D65E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+T104A+Q137E+H164N+K202E+I222V+V228I+D249N+M356L+T374A；
D33V+Q68H+N168H+V450I；
L34F，I，M，V；
L34I+K129A；
D37G，N+K129A+R156Y；
E38I，V；
M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+N153K+H164N+D249N+V272A+I337L+M356L+V397A+N415S+T421I+S424N+N441D+V450I+E489A+A490V+T517A+S522*；
M40V；
L45I；
Q68H，M，N；
Q68H+G200P+N331F；
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+K118R+R156F，Y；
Q68H+K118R+R156Y+G200P；
Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F；
Q68H+K129A，T+R156K+G200P+N331F；
Q68H+R156F，V，Y+G200P+N331F；
Q68H+R156Y；
Q68H+R156Y+H193T；
Q68H+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92A，D，I，S，V，Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92N+D97N+K118A+K?129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F；
Q68H+T92V+G200P+M310V；
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H，K，Q；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q?137E+R156Y+G200P+D324N；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q?137E+R156Y+G200P+M310L；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A，R+R156Y，F(xiàn)；
Q68H+T92V+K118A+S123P，T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156Y；
S76E，I，K，M，R，T，V，W；
S76W+G200P；
S76W+G200P+A224P；
G78A+K118A++K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A；
G78A，N，S；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A；
L80V；
A83D，E，H，I，L，N，R，S，T，Y；
K87Q；
K87V+K129A+K169A；
T92I，V；
T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y；
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F；
T92V+K129A+R156Y；
K101A+K129A；
K101R；
K101R+L102I；
T104A+P111Q+A117S+K129A+R156Y；
P111Q；
K118A+K129A；
K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y；
K118A+K129A+R156Y+A224P；
K118A+K129A+R156Y+G200P；
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I；
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+K470T；
K118A，R；
K118A+R156Y；
K118A+R156Y+G200P；
D119L；
G120A；
S123P，T；
S123T+K129A+R156Y；
K129A，F(xiàn)，I，K，R，S，T；
K129A+K169A；
K129A+K176P；
K129A+K275Q；
K129A+K445S；
K129A+K470T；
K129A+Q137E+R156Y；
K129A+Q137E+R156Y+G200P；
K129A+Q137E+R156Y+K470T；
K129A+Q137E+V139K+N140F+Q147S+R156Y；
K129A+R156Y；
K129A+R156Y+A177T+V179I+A183S；
K129A+R156Y+A328G；
K129A+R156Y+D247G；
K129A+R156Y+D249G，N，S；
K129A+R156Y+D303I，K，S，V；
K129A+R156Y+D324N；
K129A+R156Y+D366H+T374A；
K129A+R156Y+D461N，Q，T；
K129A+R156Y+E288Q；
K129A+R156Y+G200P；
K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K；
K129A+R156Y+H164N；
K129A+R156Y+H436Y；
K129A+R156Y+I10V+V14I+D19E；
K129A+R156Y+I222V+A224P+V228I+V232A；
K129A+R156Y+K176P，S；
K129A+R156Y+K275T；
K129A+R156Y+K322I+K454Q；
K129A+R156Y+K406N+N415G；
K129A+R156Y+K454Q；
K129A+R156Y+L380F+N383Y+D384G+N389T；
K129A+R156Y+N298F+E299N+G301T；
K129A+R156Y+N302K+D303L，S；
K129A+R156Y+N331F；
K129A+R156Y+P507A；
K129A+R156Y+R267H；
K129A+R156Y+R409L，T；
K129A+R156Y+S443D+K445S+L449I+V450I+S455N+M456Y；
K129A+R156Y+T244D；
K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y；
K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A；
Q137D，E；
N140F；
K142A，Q，R；
F146C+H164C；
F146K，L；
F146L+K322I；
L148K+N168D；
Q149E；
R156A，D，E，F(xiàn)，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
R156Y+N331F；
V159M；
H164A，N；
L166I；
N168D；
K169A，Q，R；
K176P；
A177E，T；
K180R；
H193A，D，S，T；
R197A，L；
H199A；
G200A，C，D，E，F(xiàn)，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
G200P+A224P；
K202N，Q，R；
S214E；
K217A；
A221K；
G225S；
V232A；
G237A，S，V；
K240A，Q，R；
K252A，Q，R；
G253A；
R267A；
L268I；
K275A，Q，R；
L278I；
F281L；
M290R；
R295A；
K306A，R；
K307Q；
M310I，L，V；
M310V+N399I；
R314A；
G316I；
K322A，R；
D324N；
N331A，C，D，E，F(xiàn)，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
S332M，P；
S332P+V397I；
R340A，N，T；
K342A；
V345I；
K347A，Q，R；
D348G；
K353Q，R；
D366H；
M373Q；
T374A；
L380F；
K382A；
N383Y；
N389A，F(xiàn)，N，V；
W391V；
K392G，Q；
D395G；
G396P；
V397S；
N399I；
K406N；
G413A，S；
K414A；
N415S；
T417K；
F418I；
V431E；
H436A；
N441G+A442E+S443D；
S443E，K，Q；
K445A，R，S；
K445C+K470C；
H448A；
K454R；
S467R+G468S+A469T；
G468S，Y；
K470P，R，T；
I473T；
K476Q；
K482A，Q，R；
K488A，Q，R，T；
A490R；
G498A，D，S；
R500A，T，V；
H512A；
T517A+G518D；或
G518D。
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