[發明專利]堿性成纖維細胞生長因子的單克隆抗體

有效

• 申請號: 200980119682.5
• 申請日: 2009-05-28
• 公開（公告）號: CN102046803A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: K·J·金;L·王;H·帕克;M·瓦斯克茲
• 申請（專利權）人: 星系生物科技責任有限公司
• 主分類號: C12P21/08
• 分類號: C12P21/08;C07K16/00;A61K39/395
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

相關申請的交叉引用

依據35U.S.C.§119(e)，本申請要求于2008年5月29日提交的美國專利申請號61/057,183和于2009年4月17日提交的美國專利申請號61/170,561的權益，所述專利申請以其整體并入本文用于所有目的。

對以計算機可讀格式提交的“序列表”、表格、或計算機程序列表的引用

寫入文件022382-000820US_SEQLIST.TXT中的序列表為12,406字節，創建于2009年5月28日，用于隨同提交的Kyung?Jin?Kim等人″堿生成纖維細胞生長因子的單克隆抗體″的申請。該文件中所包含的信息特此并入作為參考。

對于在聯邦政府資助的研究或開發下取得的發明的權利申明

本申請中所描述的工作部分地得到美國國立衛生研究院的Grant5R44CA101283-03資助。美國政府在本發明中擁有一定的權利。

發明領域

本發明一般地涉及組合單克隆抗體(mAb)和重組DNA技術用于開發新的生物學，更具體地，例如涉及生產能夠與堿性成纖維細胞生長因子結合并將其中和的單克隆抗體。

發明背景

原型成纖維細胞生長因子(FGF)、酸性FGF(也稱為FGF1)和堿性FG?F(也稱為FGF2)首次分離于20世紀70年代(FGF2由Gospodarowicz等人，J.Biol.Chem.250：2515，1975分離)。目前有22個已知的FGF家族成員，基于其活性和序列的相似性，可分成7個亞家族(Ornitz等人，Genome?Biol.2：3005.1，2001)。然而，FGF家族成員僅與以組織特異性方式表達的4種酪氨酸激酶受體(FGFR14)及其同種型結合。FGF1亞組由FGF1和FGF2組成，其結合所有4種FGFR，其中FGF2與FGFR1c特別強地結合(Ornitz等人，J.Biol.Chem.271：15292，1996)。

成熟形式的人FGF2是18kDa非糖基化多肽，其由衍生自155aa前體的146個氨基酸組成(Ornitz等人，Genome?Biol.2：3005.1，2001；Okada-Ban等人，Int.J.Biochem.Cell.Biol.32：263，2000)。該18kDa形式的FGF2不編碼信號序列，但是可以通過不依賴ER-Golgi復合物的非常規能量依賴性通道分泌(Mignatti等人，J.Cell?Physiol.151：81，1992；Florkiewicz等人，J.Cell?Physiol.162：388，1995)。除該18kDa形式之外，單拷貝的FGF2基因還編碼該蛋白質的4個高分子量(HMW)形式，通過利用4個可選CUG起始位點(提供各種大小的N-末端延伸)，產生22kDa(196個aa)、22.5kDa(201個aa)、24kDa(210個aa)和34kDa(288個aa)的蛋白質(Florkiewicz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?86：3978，1989；Prats等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?86：1836，1989)。HMW形式不分泌，但被轉運到細胞核，在細胞核中其可以以胞內分泌方式調節細胞生長或行為(Dclrieu，FEBS?Lett.468：6，2000)。

除了以高親和性結合FGFR1-4之外，FGF2還以較低的親和性與硫酸肝素蛋白聚糖(HSPG)結合。盡管FGF2以單體形式分泌，但是細胞表面HSPG使FGF2以非共價的并排構型二聚化，隨后這種構型能夠使FGF受體二聚化并活化(Mohammadi等人，Cytokine?Growth?Factor?Rev16：107，2005)。FGF和HSPG與FGFR的胞外結構域的結合誘導受體二聚化、活化和自磷酸化。

FGF、特別是FGF2具有在各種細胞類型上的廣譜活性(Ornitz等人，Genome?Biol.2：3005.1，2001)。FGF2刺激包括成纖維細胞和內皮細胞在內的某些細胞增殖(即，促有絲分裂的)，并且是某些細胞例如神經細胞的存活因子(抗細胞凋亡)(Okada-Ban，參見上文所引文獻)。其還刺激內皮細胞的分化(形態發生)和遷移(運動性)(Dow等人，Urology?55：800，2000)。FGF2參與發育，尤其是神經系統的發育。重要的是，FGF2是強效的生血管因子(Presta等人，Cytokine?and?Growth?Factor?Rev.16：159，2005)。