[發(fā)明專利]用于純化蛋白質(zhì)的方法和親和柱

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200980117691.0
• 申請(qǐng)日: 2009-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN102027002A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李在日;李英善
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 三星電子株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K1/22
• 分類號(hào): C07K1/22;C07K1/14
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 金擬粲

1.用于從樣品中純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的方法，所述樣品包括所述目標(biāo)蛋白質(zhì)，所述方法包括使蛋白酶抑制劑與具有對(duì)所述蛋白酶抑制劑的特異性結(jié)合親和力的肽標(biāo)記偶聯(lián)。

2.權(quán)利要求1的用于從樣品中純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的方法，其中所述蛋白酶抑制劑固定在支持物上并且所述肽標(biāo)記與待純化的所述目標(biāo)蛋白質(zhì)偶聯(lián)。

3.權(quán)利要求1或2的方法，包括：

使含有被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)的樣品與其上固定有蛋白酶抑制劑的支持物接觸，

其中所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)為與肽標(biāo)記共價(jià)結(jié)合的目標(biāo)蛋白質(zhì)并且所述肽標(biāo)記具有對(duì)所述蛋白酶抑制劑的特異性結(jié)合親和力，和

其中所述接觸是在所述蛋白酶抑制劑與所述肽標(biāo)記結(jié)合的條件下；

除去未結(jié)合的樣品成分；和

然后將所述目標(biāo)蛋白質(zhì)從所述支持物移除。

4.權(quán)利要求3的方法，其中將所述目標(biāo)蛋白質(zhì)從所述支持物移除包括：

從所述支持物洗脫所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)；隨后

從所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)中分離所述肽標(biāo)記以獲得所述目標(biāo)蛋白質(zhì)。

5.權(quán)利要求4的方法，其中從所述支持物洗脫所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)通過如下進(jìn)行：在使所述肽標(biāo)記與所述蛋白酶抑制劑之間的結(jié)合親和力降低的pH下洗脫，使得從所述支持物移除所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)。

6.權(quán)利要求4的方法，其中從所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)中分離所述肽標(biāo)記包括：

用蛋白酶處理經(jīng)洗脫的被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述蛋白酶為TEV蛋白酶、木瓜蛋白酶或胃蛋白酶。

8.權(quán)利要求3～7中任一項(xiàng)的方法，其中將所述目標(biāo)蛋白質(zhì)從所述支持物移除包括：

從所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)中分離所述結(jié)合的肽標(biāo)記以獲得所述目標(biāo)蛋白質(zhì)。

9.權(quán)利要求8的方法，其中從所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)中分離所述結(jié)合的肽標(biāo)記通過用蛋白酶處理所述結(jié)合的被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行。

10.權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)的方法，其中所述肽標(biāo)記源自蛋白酶。

11.權(quán)利要求10的方法，其中所述肽標(biāo)記為缺少所述蛋白酶的蛋白水解活性的所述蛋白酶的片段、缺少野生型蛋白酶的蛋白水解活性的所述蛋白酶的突變體、或者所述突變體的片段。

12.權(quán)利要求10的方法，其中所述蛋白酶為木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、凝乳酶、組織蛋白酶D、嗜熱菌蛋白酶、彈性蛋白酶、纖溶酶、凝血酶、尿激酶或膠原酶，和

所述蛋白酶抑制劑為大腸桿菌素、木瓜Kunitz型胰蛋白酶抑制劑、胃蛋白酶抑制劑A、亮肽素、Gly-Gly-Tyr-Arg、a2-巨球蛋白、a2-抗纖溶酶、人抗凝血酶III、a1-抗胰蛋白酶、博待啉、抑胃酶素、糜蛋白酶抑制素、磷酸阿米酮、異戊基膦酰基-Gly-L-Pro-L-Ala或二鉀2(R)-2-巰基甲基-4-甲基戊酰基-β-(2-萘基)-Ala-Ala酰胺。

13.權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)的方法，其中所述蛋白酶抑制劑為大腸桿菌素、木瓜Kunitz型胰蛋白酶抑制劑、胃蛋白酶抑制劑A、亮肽素、Gly-Gly-Tyr-Arg、a2-巨球蛋白、a2-抗纖溶酶、人抗凝血酶III、a1-抗胰蛋白酶、博待啉、抑胃酶素、糜蛋白酶抑制素、磷酸阿米酮、異戊基膦酰基-Gly-L-Pro-L-Ala或二鉀2(R)-2-巰基甲基-4-甲基戊酰基-β-(2-萘基)-Ala-Ala酰胺。

14.權(quán)利要求1～13中任一項(xiàng)的方法，其中所述目標(biāo)蛋白質(zhì)為抗體。

15.權(quán)利要求3～14中任一項(xiàng)的方法，其中所述被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)包括融合蛋白。

16.權(quán)利要求15的方法，其中所述融合蛋白通過如下獲得：將編碼所述肽標(biāo)記的核酸與編碼所述目標(biāo)蛋白質(zhì)的核酸連接以獲得編碼所述融合蛋白的核酸，將所述編碼所述融合蛋白的核酸插入到用于表達(dá)的載體中，和在宿主細(xì)胞中表達(dá)所述融合蛋白。

17.制備親和層析介質(zhì)的方法，包括：

將蛋白酶抑制劑固定在支持物上。