[發明專利]用于產生誘導的多能干細胞的組合化學遺傳方法

有效

• 申請號: 200980117686.X
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN102027105A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 師巖;卡羅琳·德蓬;丁生;周宏彥;林通翔;李文林;朱賽勇
• 申請（專利權）人: 斯克里普斯研究所
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種由哺乳動物非多能細胞生成誘導的多能干細胞的方法，所述方法包括：

a)使所述細胞與以下至少一種相接觸：

抑制H3K9甲基化或促進H3K9去甲基化的試劑；

L-型Ca通道激動劑；

cAMP途徑活化劑；

DNA甲基轉移酶(DNMT)抑制劑；

核受體配體；

GSK3抑制劑；

MEK抑制劑；

TGFβ受體/ALK5抑制劑；

HDAC抑制劑；和

erk抑制劑，

由此生成誘導的多能干細胞。

2.權利要求1的方法，其中所述接觸步驟包括：

a)使所述細胞與以下至少兩種相接觸：

i.抑制H3K9甲基化或促進H3K9去甲基化的試劑；和

ii.選自由以下組成的組的試劑：

L-型Ca通道激動劑；

cAMP途徑活化劑；

DNA甲基轉移酶(DNMT)抑制劑；

核受體配體；

GSK3抑制劑；

MEK抑制劑；

TGFβ受體/ALK5抑制劑；

HDAC抑制劑；和

erk抑制劑。

3.權利要求1或2的方法，其還包括：

b)將用于表達Klf多肽、Oct多肽、Myc多肽、和/或Sox多肽的一個或多個表達盒引入所述非多能細胞中。

4.權利要求3的方法，其中將Klf4和Oct?4引入所述細胞中。

5.一種由哺乳動物非多能細胞生成誘導的多能干細胞的方法，所述方法包括：

a)向所述非多能細胞中引入Oct多肽、Klf多肽、Myc多肽、和Sox多肽中的一種或多種的表達或修飾Oct多肽、Klf多肽、Myc多肽、和Sox多肽中的一種或多種的表達；

b)使所述細胞與抑制H3K9甲基化或促進H3K9去甲基化的試劑相接觸，由此生成誘導的多能干細胞。

6.權利要求5的方法，其中所述步驟a)包括使所述非多能細胞與選自Klf多肽、Oct多肽、Myc多肽、和Sox多肽的一種或多種外源多肽相接觸。

7.權利要求6的方法，其中所述步驟a)包括以下至少2個循環：

i.使所述非多能細胞與選自Klf多肽、Oct多肽、Myc多肽、和Sox多肽的一種或多種外源多肽相接觸；

ii.隨后在缺乏所述外源多肽的條件下培養所述細胞。

8.權利要求5的方法，其中所述步驟a)包括將一個或多個用于表達Klf多肽、Oct多肽、Myc多肽、和Sox多肽的表達盒引入至所述非多能細胞中。

9.權利要求5的方法，其中將用于表達Oct多肽的表達盒和用于表達Sox多肽的表達盒引入至所述非多能細胞中。

10.權利要求5的方法，其中所述引入步驟包括向所述非多能細胞中引入一個或多個用于表達KLF多肽和Oct多肽的表達盒，其中用于Myc多肽和/或Sox多肽的表達盒不引入至所述細胞中。

11.權利要求5中的方法，其中所述Klf多肽是Klf4且所述Oct多肽是Oct4。

12.權利要求5的方法，其中所述非多能細胞是體細胞。

13.權利要求5的方法，其中所述非多能細胞是成纖維細胞。

14.權利要求5的方法，其中用于表達Myc多肽的表達盒和用于表達Klf多肽的表達盒均不引入至所述非多能細胞中。

15.權利要求5的方法，其中所述引入步驟在體內進行。

16.權利要求5的方法，其中所述引入步驟在體外進行。

17.權利要求5的方法，其還包括：

c)選擇表現出多能干細胞特征的細胞。

18.權利要求5的方法，其中所述非多能細胞獲自動物；且

所述誘導的多能干細胞分化為需要的細胞類型。

19.權利要求18的方法，其中將所述需要的細胞類型引入至所述動物中。

20.權利要求19的方法，其中所述動物是人。

21.權利要求19的方法，其中所述動物是非人動物。