[發(fā)明專利]使用具有降低的異檸檬酸脫氫酶活性的微生物生產精細化學藥品的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980115679.6
• 申請日: 2009-04-28
• 公開（公告）號: CN102124119A
• 公開（公告）日: 2011-07-13
• 發(fā)明（設計）人: A·赫羅爾德;H·施羅德;W·K·鄭;C·克洛普羅格;O·策爾德爾;S·黑夫納;U·里希特;J·貝克爾;C·維特曼
• 申請（專利權）人: 巴斯夫歐洲公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12N9/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.生產精細化學藥品的方法，使用與相應的初始微生物相比，具有部分或完全降低的異檸檬酸脫氫酶活性的微生物。

2.權利要求1的方法，其中具有部分或完全降低的異檸檬酸脫氫酶活性的微生物是重組微生物。

3.權利要求1或2的方法，其中異檸檬酸脫氫酶活性降低是由于異檸檬酸脫氫酶表達的部分或完全降低。

4.權利要求3的方法，其中異檸檬酸脫氫酶活性的部分或完全降低是由于作為異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列的起始密碼子的ATG被取代，優(yōu)選的用GTG取代ATG。

5.根據(jù)權利要求1-4的任一項的方法，其中微生物是谷氨酸棒桿菌，優(yōu)選的谷氨酸棒桿菌ATCC13032、ATCC130321ysC^fbr或ATCC13286，或任一上述菌株的衍生物，優(yōu)選LU11424。

6.根據(jù)權利要求5的方法，其中微生物是LU11424，它的部分或完全降低的異檸檬酸脫氫酶活性是由于作為異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列的起始密碼子的ATG被取代，優(yōu)選的用GTG取代ATG。

7.根據(jù)權利要求1-6的任一項的方法，其中作為中間產物或終產物生產的是選自天冬氨酸家族的氨基酸及其生物化學前體的化合物。

8.權利要求7的方法，其中所述化合物是中間產物，然后酶促或非酶促轉化為有機胺、有機酸或氨基酸。

9.權利要求8的方法，其中所述中間產物是賴氨酸、或其在天冬氨酸下游的生物化學前體之一，其中終產物優(yōu)選的是所述中間產物的非天然衍生物。

10.權利要求7-9的任一項的方法，其中微生物包括至少一種異源的酶，所述酶催化在中間產物向終產物的后續(xù)轉化中的反應步驟。

11.權利要求10的方法，其中異源的酶選自催化精細化學藥品生物合成中一步或多步的酶，優(yōu)選的是從賴氨酸或其天冬氨酸下游的生物化學前體合成的精細化學藥品。

12.權利要求11的方法，其中異源的酶選自賴氨酸脫羧酶、賴氨酸-2，3-氨基變位酶和吡啶二羧酸合成酶。

13.根據(jù)權利要求1-12的任一項的方法，其中所述精細化學藥品選自

(i)天冬氨酸家族的氨基酸；

(ii)其在天冬氨酸下游的生物化學通路中的生物化學前體；

(iii)所述氨基酸(i)和前體(ii)的衍生物。

14.權利要求13的方法，其中所述精細化學藥品選自賴氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、二氨基戊烷、β-賴氨酸和吡啶二羧酸。

15.根據(jù)權利要求1-14的任一項的方法，附加條件是當精細化學藥品選自賴氨酸、蘇氨酸和甲硫氨酸時，異檸檬酸脫氫酶表達的降低不是由于修飾的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列的表達取代了微生物的天然的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列，其中，所述修飾的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列源自未修飾的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列，使得根據(jù)微生物的密碼子使用，在修飾的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列中，未修飾的異檸檬酸脫氫酶編碼核苷酸序列的至少一個密碼子被較不頻繁使用的密碼子取代。

16.權利要求14或15的方法，其中精細化學藥品是選自1，5-二氨基戊烷、β-賴氨酸和吡啶二羧酸的化合物。

17.權利要求16的方法，其中生產1，5-二氨基戊烷。

18.權利要求17的方法，其中重組微生物包括異源的賴氨酸脫羧酶。

19.權利要求17或18的方法，其中重組微生物中的二氨基乙酰轉移酶下調或者失活。

20.權利要求16的方法，其中生產β-賴氨酸。

21.權利要求20的方法，其中重組微生物包括異源的賴氨酸-2，3-氨基變位酶。

22.權利要求16的方法，其中生產吡啶二羧酸。

23.權利要求22的方法，其中重組微生物包括異源的吡啶二羧酸合成酶。

24.根據(jù)權利要求1-6的任一項的方法，其中海藻糖作為中間產物或終產物生產。