[發(fā)明專利]抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980113814.3
• 申請日: 2009-02-20
• 公開（公告）號: CN102007413A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肯·米爾恩;戴維·普里查德;埃爾林·松德熱哈根
• 申請（專利權(quán)）人: 阿克斯-希爾德診斷有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/564
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標(biāo)代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;何可

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測主體中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的存在、潛在性或傾向性的體外檢測方法。本發(fā)明特別涉及自動檢測，具體地，涉及評估類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的檢測方法，該檢測方法包括檢測主體中對環(huán)瓜氨酸肽具有特異性的內(nèi)源抗體(抗CCP抗體)的存在或水平。本發(fā)明還涉及檢測主體中對環(huán)瓜氨酸肽具有特異性的內(nèi)源抗體(抗CCP抗體)的存在或水平的方法。

背景技術(shù)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是常見的、系統(tǒng)性自身免疫性疾病，影響0.5-1％的成年人口。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的特點(diǎn)是滑液關(guān)節(jié)發(fā)炎。這能導(dǎo)致累積的關(guān)節(jié)磨損并因此降低生活質(zhì)量。一般認(rèn)為早期治療對預(yù)防不可逆的關(guān)節(jié)損害是重要的，因此盡可能在病程的早期診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是重要的。1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)分級廣泛應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷中，盡管事實(shí)上它們并不非常適合早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的診斷。這是因?yàn)槊绹L(fēng)濕病學(xué)會的標(biāo)準(zhǔn)非常依賴于臨床癥狀的表現(xiàn)，而這些癥狀并不經(jīng)常出現(xiàn)在早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中。理想地需要一種對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎高度特異和靈敏的血清學(xué)標(biāo)記物，使得風(fēng)濕病學(xué)家可以識別那些因作為積極治療方案的候選者而受益的病患。目前，類風(fēng)濕因子(RF)檢測通常被用作類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的血清學(xué)標(biāo)記物，盡管該檢測被認(rèn)為缺少特異性并通常在疾病(血清反應(yīng)陰性的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)中不存在。

最近幾年中，已經(jīng)記述了一種新的抗體標(biāo)記物，報(bào)道其對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病患具有高度的特異性(＞95％)和靈敏性(80％)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者產(chǎn)生內(nèi)源的抗環(huán)瓜氨酸肽自身抗體(抗CCP抗體)，并且這些被用作早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷中的標(biāo)記物。自從1998年第一次報(bào)導(dǎo)存在于血液中并且與含有氨基酸瓜氨酸的合成肽反應(yīng)的抗體對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有高度特異性，檢測病患血液或血清或血漿中的抗CCP抗體已經(jīng)成為這種疾病的早期診斷和準(zhǔn)確診斷中的選擇方法。

特異于CCP的內(nèi)源抗體(抗CCP抗體)的檢測與類風(fēng)濕因子檢測一樣靈敏，但具有更高的特異性。此外，抗CCP抗體的陽性檢測可以預(yù)測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在無癥狀的個(gè)體和患有未分化關(guān)節(jié)炎的病患中的未來發(fā)展。同樣已經(jīng)顯示呈現(xiàn)的抗體水平與侵蝕性疾病的進(jìn)程相關(guān)。更早的診斷和治療，優(yōu)選地在癥狀發(fā)作最早的幾個(gè)月內(nèi)，可以幫助預(yù)防不可逆的關(guān)節(jié)損害。

在現(xiàn)有技術(shù)中，已經(jīng)提出用非均相免疫測定檢測抗CCP抗體。這樣的非均相檢測是基于直接或間接將CCP包覆在固相上，在能夠使得抗CCP抗體結(jié)合至CCP的條件下，用已知含有或懷疑含有抗CCP抗體的樣品培育固相，直接或間接檢測結(jié)合的抗CCP抗體。進(jìn)一步的檢測形式是被稱為雙抗原橋檢測，其中，在檢測抗CCP抗體的情況下，CCP被用于這種免疫檢測的固相側(cè)以及檢測側(cè)，并且病患樣品中的自身抗體形成這些“雙”抗原之間的橋。典型地，當(dāng)實(shí)施非均相免疫測定時(shí)包括幾個(gè)清洗步驟。盡管這樣的方法是有效的，它們相對地慢，并且對需要的反應(yīng)物和設(shè)備有要求。自動操作這樣的檢測也很難，當(dāng)自動操作時(shí)，可靠性也相對低。

考慮到上述問題，明確需要特別是基于生化參數(shù)的方法，幫助類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的評估。此外，由于作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在性或傾向性的診斷或指示的選擇檢測的抗CCP抗體的出現(xiàn)，明確需要增加病患數(shù)量以檢測抗CCP抗體的存在。這然后提出了對用于人體樣品中抗CCP抗體的檢測和/或量化的更簡單、更快、更高靈敏度、更精確、更高通量和/或更自動的檢測方法的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)令人驚訝地確定：通過提供如本文指出的用于人體樣品中抗CCP抗體的均相檢測，可以改進(jìn)一部分或全部上述因素的平衡并因此提供更有效的臨床檢測。

在第一個(gè)方面，本發(fā)明因此提供了檢測臨床樣品中抗CCP抗體的方法，所述方法包括用至少一種包含至少一種抗CCP抗體的結(jié)合伴侶的均相試劑接觸所述樣品，從而在均相樣品混合物中形成抗CCP抗體-結(jié)合伴侶復(fù)合物的溶液或懸浮液，并檢測所述抗CCP抗體-結(jié)合伴侶復(fù)合物的存在或水平。

本發(fā)明的抗CCP抗體的評估目前的主要應(yīng)用是分析主體中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的存在、風(fēng)險(xiǎn)、潛在性和/或傾向性，其中臨床樣品從所述主體中取出。

在第二個(gè)方面，本發(fā)明因此提供用于評估主體中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的存在、風(fēng)險(xiǎn)、潛在性或傾向性的方法，所述方法包括在根據(jù)本發(fā)明的均相檢測中檢測所述主體的身體樣品中的抗CCP抗體，從而檢測所述樣品中的抗CCP抗體水平(如存在、不存在或相對或絕對的濃度)，并將因此測得的水平與所述主體中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的存在、風(fēng)險(xiǎn)、潛在性或傾向性相關(guān)聯(lián)。