[發明專利]檢測鈉/鈣交換體(NCX)“反向模式”調節化合物的基于熒光的測定法

無效

• 申請號: 200980110625.0
• 申請日: 2009-03-13
• 公開（公告）號: CN101978270A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: T·利歇爾;S·蓋貝爾;M·弗賴
• 申請（專利權）人: 賽諾菲-安萬特
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李進;李連濤

發明領域

本發明涉及鈉/鈣交換體(sodium/calcium?exchanger，NCX)和檢測其活性的方法。更具體地講，本發明涉及用于檢測NCX“反向模式”調節化合物的基于熒光的測定法。本發明還涉及包含表達(expriming)NCX的細胞的組件試劑盒(kit?of?parts)及組件試劑盒的用途。

發明背景

生命的一個基本的必要條件是區室化--以生物膜作為實現這一原則的天然工具。然而，脂雙層--構成細胞膜基礎的結構--對大多數離子和化合物是不滲透的，而這些離子和化合物的轉運是維持細胞和生物體的生命機能所必需的。這種反論的答案在于細胞膜的半滲透性質--必須跨過膜的溶質通過特定的膜蛋白轉運。這些轉運蛋白負責離子梯度的產生和維持，營養物的攝取，代謝產物的轉運，信號轉導分子的重攝取以及毒性和廢棄化合物的清除。因此，在這種情況下，轉運蛋白是允許直接影響疾病相關性異常狀況的潛在的藥物靶標。

轉運蛋白是一個新興的靶標家族，具有巨大的潛力，提供了科學和經濟機會。另一方面，就藥物開發技術而言轉運蛋白是困難的靶標類別。

人鈉/鈣交換體基因家族(亦稱為NCX或SLC8)包括三種截然不同的蛋白質NCX1、NCX2和NCX3。SLC8與SLC24一起構成Na⁺/Ca²⁺反向轉運蛋白(countertransporter)的超家族。SLC24家族成員還轉運K⁺，亦稱為NCKX。

NCX1是人鈉/鈣交換體基因家族中表征最充分的成員，它的表達在人衰竭性心臟中上調，并在心肌梗死后參與缺血-再灌注損傷(ischemia-reperfusion?damage)。抑制NCX1使衰竭性心臟的心肌收縮性正常化，并且在缺血再灌注后發揮心臟保護作用(Flesch等，Circulation?1996；Komuro和Ohtsuka，Journal?of?Pharmacological.Sciences.2004)。NCX2主要在大腦中表達，NCX3主要在大腦和骨骼肌中表達，其生理作用不詳。

鈉/鈣交換體根據膜電位和離子梯度可按兩個方向轉運Ca²⁺和Na⁺。在第一個方向上，稱為“正向模式”或“鈣輸出模式”，Ca²⁺被轉運到細胞外，Na⁺被轉運到細胞內。在另一個方向上，稱為“反向模式”或“鈣輸入模式”，轉運方向反轉過來。

鈉/鈣交換體是從不同細胞中去除Ca²⁺的重要機制。在心臟中，它排除通過Ca²⁺通道進入的Ca²⁺引起收縮，同時使Na⁺進入心臟細胞。其在心血管疾病中的關聯性參見例如Hobai，JA和O’Rourke，B(2004)Expert?Opin.Investig.Drugs，13，653-664。因此，制藥業已開發出抑制NCX的化合物，參見例如Iwamoto，T.等(2004)J.Biol.Chem.，279，7544-7553。

心臟鈉/鈣交換體的抑制對于心臟保護十分重要(例如Pogwizd，2003)。存在區分抑制NCX的“正向模式”的化合物和抑制NCX的“反向模式”的化合物的醫學需求。因此，需要分析鈣輸入模式的測定法。另外，抑制NCX1的化合物應當是選擇性的，因為NCX2和NCX3屬于同一轉運蛋白家族。因此，需要可供選擇性特征分析的測定法。

鑒定例如通過阻斷鈣流和/或抑制NCX的活化來調節鈉/鈣交換體活性的化合物是相當有價值的。這樣做的一種標準方法是通過采用膜片鉗實驗。