[發明專利]干細胞聚集體及制備和使用方法

無效

• 申請號: 200980109595.1
• 申請日: 2009-01-21
• 公開（公告）號: CN101978047A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 胡維碩;K·蘇巴馬廉;C·M·維爾費利
• 申請（專利權）人: 明尼蘇達大學董事會;魯汶卡柴列克大學
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

相關申請

本申請要求2008年1月18日提交的申請號為6I/022,121的美國臨時專利申請的優先權，所述臨時申請以引用的方式納入本文中。

技術領域

本發明涉及細胞聚集體的組合物以及制備和使用所述細胞聚集體的方法，其中所述聚集體包含不是胚胎干細胞但可分化為外胚層、內胚層和中胚層中至少兩種細胞類型的細胞，例如干細胞。

背景技術

干細胞

干細胞的特征在于它們能夠自我更新(細胞分裂但不分化)并且產生分化程度更高的后代。組織學上的典型干細胞是胚胎干(ES)細胞。ES細胞可無限自我更新。ES細胞源自胚泡的內細胞團或植入后胚胎的原始生殖細胞(胚胎生殖細胞或EG細胞)。ES和EG細胞源自小鼠、非人靈長類和人以及其他動物。當被引入到胚泡中時，ES細胞可對所有組織的形成起作用。ES細胞療法的一個缺點是當移植到出生后的動物中時，ES和EG細胞產生畸胎瘤。

ES(和EG)細胞可通過用抗SSEAl(小鼠)和SSEA4(人)的抗體進行陽性染色而被識別。在分子水平上，ES和EG細胞表達若干對這些未分化細胞特異的轉錄因子。這些因子包括oct3/4和rex-1。還發現了LIF-R(在小鼠中)和轉錄因子sox-2和rox-1。非ES細胞也表達rox-1和sox-2。ES細胞的一個標志是端粒酶活性，該酶向這些細胞提供了體外無限自我更新的可能。參見如美國專利Nos.5,453,357；5,656,479；5,670,372；5,843,780；5,874,301；5,914,268；6,110,739；6,190,910；6,200,806；6,432,711；6,436,701，6,500,668；6,703,279；6,875,607；7,029,913；7,112,437；7,145,057；7,153,684和7,294,508，所述專利的每一篇都以引用的方式納入本文中以教導ES細胞及其制備方法。已經以聚集體的形式培養ES細胞。當不附著在基底上培養時，ES細胞能夠形成擬胚體。

Oct3/4(oct3在人中)是在原腸形成前期胚胎、卵裂早期胚胎、卵泡內細胞團細胞和胚胎癌(EC)細胞中表達的轉錄因子(Nichols?et?al.，Cell95：379-91(1998))，并在細胞被誘導分化時下調。oct3/4的表達對決定胚胎發生和分化的早期步驟起重要作用。oct3/4——連同rox-1——引起鋅指蛋白rex-1的轉錄激活，同時也是保持未分化ES細胞所必需的(Rosfjordand?Rizzino，Biochem?Biophys?Res?Commun?203：1795-802(1997)；Ben-Shushan?et?al.，MoI?Cell?Biol?18：1866-78(1998))。此外，在ESC/EC中表達而且在其他分化程度更高的細胞中表達的sox-2，與oct3/4一起為保持未分化狀態所必需的(Uwanogho?et?al.，Mech?Dev?49：23-36(1995))。小鼠ES和原始生殖細胞的保持需要存在LIF。oct3/4基因在人中轉錄為至少兩種剪接變體，oct3A和oct3B。oct3B剪接變體存在于許多分化細胞中，而oct3A剪接變體(以前也命名為oct3/4)據報道對未分化的ES細胞具有特異性。參見Shimozaki?et?al.Development?130：2505-12(2003)。

發明內容

1.本發明提供一種包含細胞聚集體的組合物，其中所述細胞聚集體包含不是胚胎干細胞、胚胎生殖細胞或生殖細胞并可分化為內胚層、外胚層和中胚層胚細胞系中至少兩種細胞類型的細胞。

2.本發明還提供一種包含細胞培養中的細胞聚集體的組合物，其中所述細胞聚集體包含不是胚胎干細胞、胚胎生殖細胞或生殖細胞并可分化為內胚層、外胚層和中胚層胚細胞系中至少兩種細胞類型的細胞。

3.本發明還提供一種包含可藥用載體和細胞聚集體的藥物組合物，其中所述細胞聚集體包含不是胚胎干細胞、胚胎生殖細胞或生殖細胞并可分化為內胚層、外胚層和中胚層胚細胞系中至少兩種細胞類型的細胞。

4.本發明還提供一種包含源自細胞聚集體的細胞的組合物，其中所述細胞聚集體包含不是胚胎干細胞、胚胎生殖細胞或生殖細胞并可分化為內胚層、外胚層和中胚層胚細胞系中至少兩種細胞類型的細胞。