[發明專利]純化血清白蛋白及免疫學測定方法

有效

• 申請號: 200980109240.2
• 申請日: 2009-03-27
• 公開（公告）號: CN101978268A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 原康之;赤峰隆之;吉川勝己;川本道子
• 申請（專利權）人: 積水醫療株式會社
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 朱丹

技術領域

本發明涉及批次差少的純化血清白蛋白、及使用該純化血清白蛋白的反應性高、非特異性反應少的免疫學測定方法。

背景技術

作為血液、尿等中所含的微量物質的測定方法，采用免疫學測定方法。免疫學測定方法基于抗原抗體反應的特異性強結合，即使從各種物質混合存在的試樣中，也能夠特異性地、靈敏性良好地測定目標物質。

但是，近年來，測定血液中的癌標記物、病毒等抗原、抗細菌或病毒的抗體等極微量成分的需求增高，迫切要求免疫學測定方法具有更高的靈敏性。

作為實現免疫學測定方法的高靈敏性的嘗試，提出了例如：在測定試劑中添加反應促進劑的方法(專利文獻1)、在反應體系中大量添加惰性蛋白的方法(專利文獻2)、在不溶性載體上固定抗原或抗體并用免疫學上為惰性的蛋白等進行封閉時通過加熱使封閉劑變性的方法(專利文獻3)等。

但是，專利文獻1所述的添加反應促進劑的方法中，存在有時誘發非特異性反應的問題。

另一方面，專利文獻2、3所述的方法中，通常使用血清來源的白蛋白作為用于防止非特異性反應的封閉劑。但是，血清白蛋白存在由于批次差有時反應性顯著差異、或不能充分得到效果的問題。

專利文獻1：日本特開平4-122858號公報

專利文獻2：日本特開2000-46828號公報

專利文獻3：日本特開平10-197530號公報

發明內容

鑒于上述現狀，本發明的目的在于，提供批次差少的純化血清白蛋白、及使用該純化血清白蛋白的反應性高、非特異性反應少的免疫學測定方法。

本發明之一為一種純化血清白蛋白，在免疫學測定方法中用于封閉劑和/或不溶性載體的懸浮液，其中，以制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度為9.0mAbs以下的組分為主成分。

本發明之二為一種純化血清白蛋白，在免疫學測定方法中用于封閉劑和/或不溶性載體的懸浮液，其中，以按1mol計膽紅素結合量為0.9mmol以下的組分為主成分。

以下，詳細說明本發明。

本發明人等進行了深入研究，結果發現，使用以制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度為9.0mAbs以下的組分、或者按1mol計膽紅素結合量為0.9mmol以下的組分為主成分的純化血清白蛋白，作為封閉劑和/或不溶性載體的懸浮液時，可以進行幾乎沒有批次差、反應性高、非特異性反應少的免疫學測定，從而完成了本發明。

關于其理由目前尚未明確。血液中的血清白蛋白通常吸附膽紅素(黃色色素成分)、游離脂肪酸等，發揮對它們進行轉運的作用。推測以往的血清白蛋白的批次差可能是由于這些吸附物的有無及量比引起的。滿足本發明之一、二的條件的組分是吸附物極少的組分，通過使用以該組分為主成分的純化血清白蛋白，推測可能可以實現反應性高、非特異性反應少的免疫學測定。

本發明之一的純化血清白蛋白，以制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度為9.0mAbs以下的組分為主成分。優選以制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度為8.0mAbs以下的組分為主成分的純化血清白蛋白，更優選以制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度為7.0mAbs以下的組分為主成分的純化血清白蛋白。

血清白蛋白的這樣的組分，是膽紅素(黃色色素成分、吸收波長438nm(BSA結合型膽紅素的吸收波長為463nm))等的吸附極少的組分，將以這樣的組分為主成分的本發明的純化血清白蛋白用于封閉劑和/或不溶性載體的懸浮液時，可以進行幾乎沒有批次差、反應性高、非特異性反應少的免疫學測定。

另外，“作為主成分”是指，優選僅由上述組分構成，但是在不損害本發明的目標效果的范圍內可以混入其它組分。

容許混入的其它組分的量比因組分而異。127T.U.下的波長700nm下的吸光度變化量可以維持0.06Abs以上的比例由表5及圖1求出。

例如，在制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度超過9.0mAbs且為13.5mAbs的組分的情況下，可以混入至總量的45重量％左右。

例如，在制成1％水溶液時使用光程長為1.0cm的石英池在463nm的波長下測定的吸光度超過9.0mAbs且為20.0mAbs以下的組分的情況下，可以混入至總量的15重量％左右。