[發明專利]使用肺癌特異性甲基化標記基因檢測肺癌的方法

有效

• 申請號: 200980108952.2
• 申請日: 2009-02-18
• 公開（公告）號: CN101970692B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 安成晥;文永鎬;吳泰禎
• 申請（專利權）人: 基因特力株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司11006
• 代理人: 徐金國

技術領域

本發明涉及一種使用肺癌特異性生物標記物檢測肺癌的方法，尤其是用于肺癌診斷的生物標記物，其可檢測PCDHGA12的甲基化作用，它的5’UTR或外顯子1區域在轉化的肺癌細胞內特異性地甲基化；和使用該生物標記物檢測肺癌和其發展階段的方法。

背景技術

在20世紀抽煙變得普遍之前，肺癌是一個非常稀有的疾病。肺癌的發生率快速增長，在西方國家，肺癌在男性和女性中均是最多發的癌癥。在韓國，肺癌通常發生在男性中，它的發病率在女性中也驚人得增長。肺癌發病率的這種增長是歸根于抽煙、空氣污染和工業污染等等。

即使在藥物科學發達的現代，肺癌病人的5年生存率，尤其是實體瘤患者(除了血癌患者)小于50％，所有癌癥患者中的大約2/3在晚期被診斷，大多數是在癌癥診斷后兩年內死亡。癌癥治療中的這種拙劣的結果不僅是治療方法的問題，還因為在早期診斷癌癥和精確地確診晚期癌癥，和在癌癥治療后實施癌癥患者的跟蹤(follow-up)并不容易。

最近，基因檢測方法被積極地用于診斷癌癥的嘗試。在它們中，典型的方法是使用PCR技術確定是不是ABL：BCR(Abelson鼠科白血病病毒致癌基因同源體：斷裂點叢集區)的融合基因，其是存在于血液中的白血病的基因指示物。此外，已嘗試另一個方法，由癌細胞表達的基因的存在性通過RT-PCR檢測和印跡檢測，由此診斷血液細胞中癌細胞 的存在。然而，這個方法具有缺點：它只能運用于某些癌癥，包括前列腺癌和惡性黑色素瘤，具有較高的錯誤陽性率。而且，它難于在這種方法中的檢測和讀取的標準化，它的應用也受到限制(Kopreski，M.S.等人，Clin.Cancer Res.，5：1961，1999；Miyashiro，I.et al.，Clin.Chem.，47：505，2001)。另外，最近已積極地嘗試使用在血清或血漿中的DNA的基因檢測。使用從癌癥中分離的DNA以分析癌癥特異性基因異常，比如致癌基因和腫瘤抑制基因的突變、缺失和功能喪失，允許癌癥的診斷。

同時，正在嘗試通過基因或者抗體測試來檢測在肺癌患者的痰或者支氣管肺泡灌洗液中癌細胞或者致癌基因的存在的方法(Palmisano，W.A.等人，Cancer Res.，60：5954，2000；Sueoka，E.等人，Cancer Res.，59：1404，1999)。然而，為了準確地診斷涉及大量的基因異常和顯示不同突變的癌癥，需要能夠以準確和自動的方式同步分析大量基因的方法，但這樣的方法仍未建立。

因此，最近提出通過測量DNA甲基化的診斷癌癥的方法。DNA甲基化主要發生在特異性基因的啟動子區域的CpG島的胞嘧啶上，因此阻斷了轉錄因子的結合，從而特異性基因的表達被沉默。如此，腫瘤抑制基因的啟動子CpG島的甲基化的分析是非常有助于癌癥研究的。活躍的嘗試已經用于分析啟動子CpG島的甲基化，通過比如甲基化特異性PCR(此后，稱為“MSP”)的方法或者自動的堿基配對和使用分析結果診斷和篩選癌癥的方法。

雖然存在啟動子CpG島的甲基化是否直接誘導致癌基因或是在致癌基因中導致二級反應的爭論，已肯定在不同癌癥中的腫瘤抑制基因、DNA修復基因、細胞循環調控基因和類似物是高度甲基化的(hyper-methyl ationed)，從而這些基因的表達被沉默。尤其是，眾所周知特異性基因的啟動子區域的高甲基化發生在致癌基因的早期。

因此，腫瘤相關的基因的啟動子甲基化是癌癥的重要指標，可以用 于許多應用中，包括癌癥的診斷和早期檢測，致癌基因的風險預測，癌癥預后的預測，治療后的隨診，抗癌治療的反應的預測。事實上，最近已經活躍地嘗試檢查血液、痰、唾液、糞便或者尿液中的腫瘤相關基因的啟動子甲基化，和利用檢測結果診斷和治療不同的癌癥(Esteller，M.等人，Cancer Res.，59：67，1999；Sanchez-Cespedez，M.等人，Cancer Res.，60：892，2000；Ahlquist，D.A.et al.，Gastroenterol.，119：1219，2000)。