[發明專利]具有改進的穩定性的脂肪分解酶變體及編碼該變體的多核苷酸

有效

• 申請號: 200980107002.8
• 申請日: 2009-02-26
• 公開（公告）號: CN101990573A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 杰斯珀·文德;金·博施;阿倫·斯文德森;羅伯特·范德蘭斯;利斯·M·米克爾森;克里斯琴·I·喬爾根森;沙姆坎特·A·帕特卡
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C11D3/386
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

發明領域

本發明涉及具有改善的洗滌劑中穩定性的脂肪分解酶變體及制備它們的方法。本發明特別涉及細毛嗜熱霉(Thermomyces?lanuginosus)脂肪酶的脂肪分解酶變體。

背景技術

已知使用真菌脂肪分解酶，例如，來自細毛嗜熱霉(Thermomyceslanuginosus)(同物異名疏棉狀腐質霉(Humicola?lanuginosa))的脂肪酶，用于多種產業上的目的，例如，改善洗滌劑的功效。因此，來源于細毛嗜熱霉(同物異名疏棉狀腐質霉，EP258068和EP305216)的脂肪酶以商品名(Novozyme?A/S的產品)出售用作洗滌劑用途。WO?0060063描述了在洗滌劑溶液中具有特別好的初次洗滌(first-wash)性能的細毛嗜熱霉脂肪酶的變體。除了將脂肪酶用作洗滌劑酶從衣物或其它紡織品去除脂質或脂肪污跡之外，它們亦用作供面包和其它烘焙產品用的生面團的添加劑，并用于消除在紙漿和紙生產中的樹脂(pitch)問題。在一些應用中，期望具有改善的熱穩定性的脂肪分解酶(EP?374700，WO?9213130)，而在其他應用中期望其在洗滌劑中的穩定性。WO?92/05249，WO?92/19726和WO?97/07202公開了細毛嗜熱霉(疏棉狀腐質霉)脂肪酶的變體。

發明內容

在第一個方面，本發明涉及親本脂肪分解酶的變體，其中所述變體：(a)具有與親本脂肪分解酶比較包含對如下氨基酸殘基的取代的氨基酸序列，所述氨基酸殘基對應于SEQ?ID?NO：2的氨基酸27、216、227、231、233和256中的任一；和(b)與親本脂肪分解酶比較在洗滌劑中更加穩定。

在進一步的方面，本發明涉及編碼所述變體的分離的多核苷酸，包含該多核苷酸的核酸構建體，包含該核酸構建體的重組表達載體，以及包含該核酸構建體或該重組表達載體的轉化的宿主細胞。

在進一步的方面，本發明涉及制備權利要求1-9任一所述的脂肪分解酶的方法，包括下述步驟：(a)將包含所述核酸構建體的轉化宿主細胞或包含所述重組表達載體的轉化宿主細胞在有益于產生所述變體的條件下進行培養，其中所述核酸構建體或重組表達載體包含所述多肽；和(b)回收所得變體。

在進一步的方面，本發明涉及所述脂肪分解酶變體在羧酸酯的水解，或酯的水解、合成或酯交換中的用途。

在進一步的方面，本發明涉及包含所述脂肪分解酶變體的配制物。

在進一步的方面，本發明涉及所述脂肪分解酶變體用于生產在洗滌劑中穩定的配制物的用途。

附圖簡述

圖1顯示脂肪酶的比對。

序列列表

SEQ?ID?NO：1顯示編碼來自細毛嗜熱霉的脂肪酶的DNA序列。

SEQ?ID?NO：2顯示來自細毛嗜熱霉的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：3顯示來自反射犁頭霉(Absidia?reflexa)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：4顯示來自傘枝犁頭霉(Absidia?corymbifera)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：5顯示來自曼赫根毛霉(Rhizmucor?miehei)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：6顯示來自米根霉(Rhizopus?oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：7顯示來自黑曲霉(Aspergillus?niger)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：8顯示來自塔賓曲霉(Aspergillus?tubigensis)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：9顯示來自尖鐮孢(Fusarium?oxysporum)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：10顯示來自異孢鐮孢(Fusarium?heterosporum)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：11顯示來自米曲霉(Aspergillus?oryzea)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：12顯示來自沙門柏干酪青霉(Penicilium?camembertii)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：13顯示來自臭曲霉(Aspergillus?foetidus)的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：14顯示來自黑曲霉的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：15顯示來自米曲霉的脂肪酶的氨基酸序列。

SEQ?ID?NO：16顯示來自Landerinapenisapora的脂肪酶的氨基酸序列。

發明詳述