[發(fā)明專利]利用全細(xì)胞捕獲和ATP分析進(jìn)行樣品細(xì)菌分析的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200980105955.0
• 申請(qǐng)日: 2009-02-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101952729A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·馬爾科·博馬里托;約瑟夫·J·斯托費(fèi)爾;斯里達(dá)爾·V·達(dá)薩拉塔;賈森·W·比約克;帕特里克·A·馬赫;瑪拉·S·賴夫-溫納;郭春梅;希瑟·M·韋伯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 3M創(chuàng)新有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 張穎;樊衛(wèi)民

相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2008年2月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/066,336的權(quán)利，將其以引用的方式并于本文。

背景技術(shù)

對(duì)常用抗生素具有耐藥性的細(xì)菌的出現(xiàn)是一個(gè)日益成為的問(wèn)題，嚴(yán)重影響對(duì)被感染個(gè)體的治療。因此，在早期并以相對(duì)快速的方式確定這些細(xì)菌的存在以更好地控制這些細(xì)菌變得越來(lái)越重要。這也適用于多種其他微生物。

一種這類非常受關(guān)注的微生物為金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，“S.aureus”)。這是一種引起廣譜感染的病原體，所述感染包括：淺表?yè)p傷，例如小的皮膚膿腫和傷口感染；全身性且致命的病癥，例如心內(nèi)膜炎、肺炎和敗血病；以及中毒癥，例如食物中毒和中毒性休克綜合征。一些菌株(例如，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌)對(duì)除少數(shù)精選的抗生素之外的所有抗生素具有耐藥性。

目前檢測(cè)微生物尤其是對(duì)抗生素具有耐藥性的細(xì)菌的技術(shù)一般比較費(fèi)時(shí)且通常涉及以純種形式培養(yǎng)細(xì)菌。一種此類用于鑒定與急性感染相關(guān)的病原葡萄球菌(即人類和動(dòng)物中的金黃色葡萄球菌以及動(dòng)物中的中間葡萄球菌(S.intermedius)和豬葡萄球菌(S.hyicus))的技術(shù)是基于微生物凝結(jié)血漿的能力。已描述了至少兩種不同的凝固酶試驗(yàn)：游離凝固酶的試管試驗(yàn)和“細(xì)胞結(jié)合的凝固酶”或聚集因子的玻片試驗(yàn)。試管凝固酶試驗(yàn)通常涉及將腦心浸出液肉湯中的過(guò)夜培養(yǎng)物與重構(gòu)的血漿混合，將該混合物溫育4小時(shí)并通過(guò)緩慢傾斜試管來(lái)觀察血塊形成。對(duì)于金黃色葡萄球菌建議將受試物溫育過(guò)夜，因?yàn)樯倭康木昕赡苄枰?小時(shí)以上才能形成血塊。玻片凝固酶試驗(yàn)通常更快并且更經(jīng)濟(jì)；然而，10％至15％的金黃色葡萄球菌菌株可能會(huì)產(chǎn)生陰性結(jié)果，這需要通過(guò)試管試驗(yàn)重新檢驗(yàn)分離物。

盡管本領(lǐng)域已描述了檢測(cè)金黃色葡萄球菌以及其他微生物的方法，但改進(jìn)的檢測(cè)方法中將存在優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供捕獲細(xì)菌全細(xì)胞然后直接或間接進(jìn)行腺苷三磷酸(ATP)分析的方法。這些方法涉及使用對(duì)特定細(xì)菌特征性的一種或多種獨(dú)特被分析物具有抗原特異性的一種或多種抗體(優(yōu)選對(duì)特定細(xì)菌特征性的兩種或更多種獨(dú)特被分析物具有抗原特異性的兩種或更多種抗體)。如果使用不止一種抗體，那么這兩種或更多種抗體優(yōu)選在它們的結(jié)合特性上協(xié)同。也就是說(shuō)，它們能夠同時(shí)結(jié)合靶標(biāo)被分析物的各獨(dú)特區(qū)域或最好為互補(bǔ)結(jié)合，通過(guò)所述互補(bǔ)結(jié)合，對(duì)某獨(dú)特被分析物的結(jié)合可被另一種抗體的結(jié)合增強(qiáng)。

在一個(gè)這樣的實(shí)施例中，本發(fā)明提供分析特定細(xì)菌的方法，其中該方法包括：提供疑似包括靶標(biāo)全細(xì)胞的樣品，所述細(xì)胞包含特定細(xì)菌特征性的一種或多種被分析物；提供對(duì)該特定細(xì)菌特征性的一種或多種獨(dú)特被分析物具有抗原特異性的一種或多種抗體，其中所述抗體選自MAb-76、MAb-107、親和純化的RxClf40、親和純化的GxClf40、MAb?12-9、它們的片段以及它們的組合；提供包含磁性粒子的固體支撐物材料；使該樣品、該固體支撐物材料和該一種或多種抗體之間在如果存在具有特定細(xì)菌特征性的一種或多種被分析物的靶標(biāo)全細(xì)胞的話有效捕獲所述靶標(biāo)全細(xì)胞的條件下接觸；從該樣品分離捕獲的靶標(biāo)全細(xì)胞；裂解該靶標(biāo)全細(xì)胞以形成裂解物；以及通過(guò)直接或間接分析裂解物的ATP來(lái)分析該特定細(xì)菌是否存在。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，該一種或多種(優(yōu)選兩種或更多種)抗體與該固體支撐物材料連接形成被分析物結(jié)合性材料，從而該方法包括在如果存在具有特定細(xì)菌特征性的一種或多種被分析物的全細(xì)胞的話有效捕獲所述全細(xì)胞的條件下，提供該樣品和該被分析物結(jié)合性材料之間的接觸。提供該樣品和該被分析物結(jié)合性材料之間的接觸可包括該樣品和該一種或多種抗體之間的同時(shí)和/或依次接觸，優(yōu)選同時(shí)接觸。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，提供該樣品、該固體支撐物材料和該一種或多種抗體之間的接觸包括提供該一種或多種抗體和該樣品之間的接觸以形成結(jié)合抗體的全細(xì)胞，隨后提供該抗體結(jié)合的全細(xì)胞和該固體支撐物材料之間的接觸。

在某些實(shí)施例中，該特定細(xì)菌包括革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，特別是金黃色葡萄球菌。

在某些實(shí)施例中，每個(gè)粒子具有設(shè)置在其上的結(jié)合不同被分析物的至少兩種抗體。

在某些實(shí)施例中，先將靶標(biāo)全細(xì)胞從磁性粒子移除再進(jìn)行裂解。