[實(shí)用新型]檢測青霉素的免疫膠體金試劑板

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200920192426.6
• 申請日: 2009-09-02
• 公開（公告）號: CN201535777U
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張少恩;桑麗雅;卜令杰;邵偉
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州南開日新生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/566
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于獸藥殘留免疫化學(xué)快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測試劑板。

背景技術(shù)

青霉素類抗生素是β-內(nèi)酰胺類中一大類抗生素的總稱，因?yàn)閮r(jià)廉、方便、低毒、高效等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。青霉素廣泛應(yīng)用于治療奶牛疾病、促進(jìn)奶牛生長、降低發(fā)病率、提高飼料利用率，帶來乳業(yè)增產(chǎn)的同時(shí)，也不可避免的造成了原料奶抗生素殘留問題，最終導(dǎo)致青霉素在人體內(nèi)的殘留。由此可引起過敏反應(yīng)，造成人體內(nèi)環(huán)境平衡的紊亂和菌群失調(diào)，同時(shí)在進(jìn)行藥物治療時(shí)會產(chǎn)生耐藥性，另外青霉素殘留會導(dǎo)致牛乳的發(fā)酵不能正常完成，對乳品生產(chǎn)企業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，對進(jìn)出口貿(mào)易造成一定影響。我國農(nóng)業(yè)部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定青霉素G和普魯卡因青霉素在奶類中殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為4μg/kg。

目前，對于青霉素類藥物殘留的檢測方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如HPLC及LC-MS，具有特異性好、準(zhǔn)確率高的特點(diǎn)，是各大檢測機(jī)構(gòu)對檢測樣本進(jìn)行確證的首選方法，但存在對設(shè)備、環(huán)境、操作技能等要求，不利于大規(guī)模樣本篩選，因而不適合廣大基層部門。免疫分析法，如酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，具有檢測量大，操作相對簡單等優(yōu)點(diǎn)，越來越多地被用于動物性食品中抗生素殘留的檢測，但是ELISA法整個(gè)操作時(shí)間仍需要1-2h，且需用到特殊儀器設(shè)備，具有一定局限性。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于針對上述方法的不足，提供一種靈敏度高、操作簡單、檢測時(shí)間短、不需要特殊儀器設(shè)備、生產(chǎn)成本低的原奶中青霉素殘留免疫膠體金快速檢測試劑板。

本實(shí)用新型試劑板由上下兩塊塑料模板、背襯及粘附在背襯上依次緊密相連的樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊組成。

其中樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊相鄰各部分間有1-2mm的重疊，其目的一方面是保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位順利進(jìn)行，另一方面是為了使樣品溶液與樣品墊有充分反應(yīng)時(shí)間，樣品墊上的緩沖體系可以中和樣品溶液的酸堿度，保證樣品溶液中的有效成分與膠體金結(jié)合墊上的金標(biāo)抗體順利發(fā)生反應(yīng)。

膠體金結(jié)合墊上包被有抗青霉素單克隆抗體與膠體金的結(jié)合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有青霉素G-載體蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測線和質(zhì)控線。偶聯(lián)青霉素G的載體蛋白可為牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血藍(lán)蛋白(KLH)等?？骨嗝顾貑慰寺】贵w為可以識別青霉素G、氨芐青霉素和羥氨芐青霉素的免疫球蛋白或其片段。

本實(shí)用新型所描述的試劑板的各部分組成成分與功能如下：

塑料模板，起固定試紙條及標(biāo)示功能區(qū)(加樣孔、檢測區(qū)、控制區(qū))的作用

背襯為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用。

樣品墊由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液與緩沖樣品溶液pH值的作用。

膠體金結(jié)合墊由聚酯膜制成，其上標(biāo)記有抗青霉素單克隆抗體與膠體金的結(jié)合物，是樣品溶液中的有效成分與金標(biāo)抗體發(fā)生反應(yīng)的場所。

硝酸纖維素膜部分主要作用是將反應(yīng)結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。

吸水墊為濾紙，作為吸水部分其作用是將移動上來的多余的溶液吸收。

本實(shí)用新型試劑板具有如下有益效果：

(1)特異性好。本實(shí)用新型試劑板對青霉素類藥物中的青霉素G、氨芐青霉素及羥氨芐青霉素的交叉反應(yīng)率分別為100％、70％及60％，對其他種類的抗生素包括氯霉素、喹諾酮類、四環(huán)素類、慶大霉素、鏈霉素、磺胺類藥物等無交叉反應(yīng)，可見，本實(shí)用新型對青霉素類藥物反應(yīng)均有高度專一性。

(2)靈敏度高。本實(shí)用新型試劑板對原奶中青霉素G的檢出限為4μg/kg，可以滿足我國農(nóng)業(yè)部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中對青霉素G和普魯卡因青霉素在奶類中最高殘留限量4μg/kg的規(guī)定要求。

(3)操作簡單快捷，不依賴任何實(shí)驗(yàn)設(shè)備，不需任何專業(yè)培訓(xùn)。本實(shí)用新型試劑板將反應(yīng)所需的大部分原理整合到試劑條中，滴樣后抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行，大大縮短了檢樣時(shí)間，且樣品無需特殊處理，滴樣后3-5分鐘內(nèi)即可用肉眼通過判斷硝酸纖維素膜上的檢測線和質(zhì)控線的顏色深淺讀取結(jié)果，檢測過程無需特殊儀器輔助，普通人員均可操作，不需要專業(yè)培訓(xùn)，極易推廣使用。

(4)成本低，效益好。本實(shí)用新型試劑板生產(chǎn)工藝成熟、流程簡單，生產(chǎn)成本低廉，投資少，收效快。

附圖說明