[實用新型]檢測青霉素的免疫膠體金試劑板

有效

• 申請號: 200920192426.6
• 申請日: 2009-09-02
• 公開（公告）號: CN201535777U
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 張少恩;桑麗雅;卜令杰;邵偉
• 申請（專利權）人: 杭州南開日新生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/566
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于獸藥殘留免疫化學快速檢測技術領域，具體涉及一種檢測試劑板。

背景技術

青霉素類抗生素是β-內酰胺類中一大類抗生素的總稱，因為價廉、方便、低毒、高效等特點，被廣泛應用于實際生產。青霉素廣泛應用于治療奶牛疾病、促進奶牛生長、降低發病率、提高飼料利用率，帶來乳業增產的同時，也不可避免的造成了原料奶抗生素殘留問題，最終導致青霉素在人體內的殘留。由此可引起過敏反應，造成人體內環境平衡的紊亂和菌群失調，同時在進行藥物治療時會產生耐藥性，另外青霉素殘留會導致牛乳的發酵不能正常完成，對乳品生產企業造成巨大經濟損失，對進出口貿易造成一定影響。我國農業部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規定青霉素G和普魯卡因青霉素在奶類中殘留限量標準為4μg/kg。

目前，對于青霉素類藥物殘留的檢測方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如HPLC及LC-MS，具有特異性好、準確率高的特點，是各大檢測機構對檢測樣本進行確證的首選方法，但存在對設備、環境、操作技能等要求，不利于大規模樣本篩選，因而不適合廣大基層部門。免疫分析法，如酶聯免疫吸附法(ELISA)，具有檢測量大，操作相對簡單等優點，越來越多地被用于動物性食品中抗生素殘留的檢測，但是ELISA法整個操作時間仍需要1-2h，且需用到特殊儀器設備，具有一定局限性。

實用新型內容

本實用新型的目的在于針對上述方法的不足，提供一種靈敏度高、操作簡單、檢測時間短、不需要特殊儀器設備、生產成本低的原奶中青霉素殘留免疫膠體金快速檢測試劑板。

本實用新型試劑板由上下兩塊塑料模板、背襯及粘附在背襯上依次緊密相連的樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊組成。

其中樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊相鄰各部分間有1-2mm的重疊，其目的一方面是保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位順利進行，另一方面是為了使樣品溶液與樣品墊有充分反應時間，樣品墊上的緩沖體系可以中和樣品溶液的酸堿度，保證樣品溶液中的有效成分與膠體金結合墊上的金標抗體順利發生反應。

膠體金結合墊上包被有抗青霉素單克隆抗體與膠體金的結合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有青霉素G-載體蛋白偶聯物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測線和質控線。偶聯青霉素G的載體蛋白可為牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血藍蛋白(KLH)等。抗青霉素單克隆抗體為可以識別青霉素G、氨芐青霉素和羥氨芐青霉素的免疫球蛋白或其片段。

本實用新型所描述的試劑板的各部分組成成分與功能如下：

塑料模板，起固定試紙條及標示功能區(加樣孔、檢測區、控制區)的作用

背襯為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用。

樣品墊由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液與緩沖樣品溶液pH值的作用。

膠體金結合墊由聚酯膜制成，其上標記有抗青霉素單克隆抗體與膠體金的結合物，是樣品溶液中的有效成分與金標抗體發生反應的場所。

硝酸纖維素膜部分主要作用是將反應結果以肉眼可見的顏色表征出來。

吸水墊為濾紙，作為吸水部分其作用是將移動上來的多余的溶液吸收。

本實用新型試劑板具有如下有益效果：

(1)特異性好。本實用新型試劑板對青霉素類藥物中的青霉素G、氨芐青霉素及羥氨芐青霉素的交叉反應率分別為100％、70％及60％，對其他種類的抗生素包括氯霉素、喹諾酮類、四環素類、慶大霉素、鏈霉素、磺胺類藥物等無交叉反應，可見，本實用新型對青霉素類藥物反應均有高度專一性。

(2)靈敏度高。本實用新型試劑板對原奶中青霉素G的檢出限為4μg/kg，可以滿足我國農業部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中對青霉素G和普魯卡因青霉素在奶類中最高殘留限量4μg/kg的規定要求。

(3)操作簡單快捷，不依賴任何實驗設備，不需任何專業培訓。本實用新型試劑板將反應所需的大部分原理整合到試劑條中，滴樣后抗原抗體反應在固相膜上快速進行，大大縮短了檢樣時間，且樣品無需特殊處理，滴樣后3-5分鐘內即可用肉眼通過判斷硝酸纖維素膜上的檢測線和質控線的顏色深淺讀取結果，檢測過程無需特殊儀器輔助，普通人員均可操作，不需要專業培訓，極易推廣使用。

(4)成本低，效益好。本實用新型試劑板生產工藝成熟、流程簡單，生產成本低廉，投資少，收效快。

附圖說明