[實用新型]一種甲基苯丙胺的膠體金標記免疫檢測墊、試紙

無效

• 申請號: 200920146329.3
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN201413327Y
• 公開（公告）日: 2010-02-24
• 發明（設計）人: 高俊鈺
• 申請（專利權）人: 高俊鈺
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及一種體外快速免疫檢測工具，具體涉及一種甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記墊、試紙。

背景技術

甲基苯丙胺(又名去氧麻黃堿或安非他命)呈白色結晶體或粉末狀，俗稱冰毒。甲基苯丙胺為中樞興奮劑，能抑制丁氨基氧化酶的活性，使腎上腺素和腎上腺素能神經的化學傳導物質-去甲基腎上腺素的破壞減慢，大腦皮質以及皮質下中樞產生興奮，具有欣快、警覺及抑制食欲的作用。濫用者會處于強烈興奮狀態，表現為不吃不睡、活動過度、情感沖動、偏執狂、妄想、幻覺和暴力傾向。為了捕捉和感受一種短暫即逝的強烈快感或興奮，避免快感過后的失落、抑郁、疲勞感，常常導致強迫性用藥行為。因而極易成癮。甲基苯丙胺是目前國際、國內蔓延最廣，流行最快的毒品之一。

甲基苯丙胺可以使用多種方法進行檢測，如氣相色譜(GC)氣相色譜/質譜(GC/MS)，高效液相色譜(HPLC)等。但是費用較高，所需的時間較長。因此目前在進行毒品篩查過程中更多使用的是免疫膠體金檢測方法。

免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，膠體金標記，實質上是蛋白質等帶正電荷基團的高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋直質等被吸附物質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學，此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。

目前毒品檢測中使用的免疫膠體金檢測方法原理為將氯金酸用還原法制成一定直徑的金溶膠顆粒，標記抗體。以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移。在移動的過程中，會發生相應的抗原抗體反應，并通過免疫金的顏色而顯示出來。樣本中的被檢測成分在流動的過程中與膠體金標記的特異性單克隆抗體結合，抑制了抗體與硝酸纖維素(NC)膜檢測線上被檢測成分-BSA偶聯物的結合，使檢測線不顯顏色，結果為陽性；反之，檢測線顯色，結果為陰性。

在膠體金免疫檢測法中，可使用的膠體金通常是紅色型或紫紅色型。

下面以目前普遍使用的甲基苯丙胺膠體金標記免疫檢測方法為例進行說明。

(1)免疫原的制備：采用活化脂法，將牛血清白蛋白(BSA)與甲基苯丙胺結合，制成甲基苯丙胺的免疫原。

(2)抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備：將制備的甲基苯丙胺合成免疫原免疫小鼠，提取小鼠腹水，分離純化以得到抗甲基苯丙胺單克隆抗體。

(3)膠體金的制備：采用還原法制備膠體金，常用的還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。

(4)膠體金標記抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備：將特異抗體加入到膠體金溶液中混合，獲得膠體金標記的抗體。

(5)抗膠體金標記抗體的二抗的制備：采用常規的制備方法制備二抗。

(6)硝酸纖維素膜和玻璃纖維素膜的處理

硝酸纖維膜的包被：硝酸纖維膜作為檢測過程中的抗原抗體反應的載體，要依次包被甲基苯丙胺-BSA結合物(測試線即T線)和抗膠體金標記抗體的二抗(質控線即C線)。

玻璃纖維膜處理：將檢測閾值為1000ng/mL的凍干的膠體金標記的抗甲基苯丙胺的特異抗體固定于玻璃纖維膜，制成膠體金墊。

(7)免疫層析試紙條的制備

在塑料底板7上分別將吸液用玻璃纖維6、固著凍干膠體金標記的抗甲基苯丙胺的特異抗體的玻璃纖維膜金標墊5、包被甲基苯丙胺-BSA結合物和抗膠體金標記抗體的二抗的硝酸纖維素膜2和吸水墊1依次粘貼，如圖1所示，其中硝酸纖維素膜2兩端分別與吸水墊和抗甲基苯丙胺單抗金標墊5互相交疊連接，在抗甲基苯丙胺單抗金標墊5上壓有玻璃纖維6。

(8)樣品測試和結果判斷方法