[發(fā)明專利]黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙盒及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910305934.5
• 申請(qǐng)日: 2009-08-21
• 公開（公告）號(hào): CN101694496A
• 公開（公告）日: 2010-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倫艷霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/552
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 劉英蘭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種對(duì)腐生真菌所產(chǎn)生代謝物的檢測(cè)技術(shù)，特別涉及一種黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙盒及其制備方法。

背景技術(shù)

真菌毒素對(duì)糧食、飼料的污染是一個(gè)全球性的問題，我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，人民以谷物為主食的飲食習(xí)慣，使真菌毒素的污染問題顯得更為突出。黃曲霉毒素是真菌毒素的重要代表之一，對(duì)世界上30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)進(jìn)行的調(diào)查表明，危害程度排在第一位。黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等的代謝產(chǎn)物，對(duì)人、畜肝臟的損害程度為所有生物毒素之首。黃曲霉毒素容易污染花生、玉米、大米、小麥、豆類、堅(jiān)果類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等食品，其中花生和玉米最容易受到污染。現(xiàn)已知飼料、食品或培養(yǎng)基中的黃曲霉毒素有AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂以及由AFB₁、AFB₂在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物AFM₁、AFM₂等，在天然污染的食物中以AFB₁的毒性最強(qiáng)，是已知最強(qiáng)的經(jīng)口致癌物。

黃曲霉毒素超標(biāo)是我國(guó)食品出口頻繁遇到的問題，我國(guó)每年食品出口因黃曲霉毒素超標(biāo)而遭受通報(bào)扣留屢屢發(fā)生，尤其體現(xiàn)在花生、谷物、果仁中。為了降低AFB₁對(duì)人類的危害，世界各國(guó)不斷制定盡可能低的食品中AFB₁的限量標(biāo)準(zhǔn)，通過檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。高靈敏的儀器分析方法和快速有效的免疫分析方法正逐漸被應(yīng)用于AFB₁的檢測(cè)。目前測(cè)定AFB₁的主要方法有薄層層析法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫親和層析凈化高效液相色譜等。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，尤其是中國(guó)加入WTO后，農(nóng)副產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易的擴(kuò)大，人們對(duì)食品質(zhì)量和健康水平要求的提高，研發(fā)并推廣簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異性并適用于樣品實(shí)地檢測(cè)的方法勢(shì)在必行。

免疫膠體金技術(shù)是80年代繼三大標(biāo)記技術(shù)(熒光素、放射性同位素和酶)后發(fā)展起來(lái)并固相標(biāo)記(以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng))的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。目前已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，尤其是在醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用。當(dāng)前應(yīng)用較多的免疫膠體金快速診斷技術(shù)主要有兩種：斑點(diǎn)免疫金滲濾試驗(yàn)和免疫膠體金層析法。該診斷技術(shù)最大特點(diǎn)是單份測(cè)定、簡(jiǎn)單快速、特異敏感，像層析試紙條技術(shù)，不需任何儀器設(shè)備和試劑，幾分鐘就可用肉眼觀察到顏色鮮明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并可保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果。免疫膠體金層析技術(shù)現(xiàn)已成為當(dāng)今快速敏感的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一，特別適合于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時(shí)間緊的檢測(cè)和大面積普查。目前膠體金主要應(yīng)用于禽流感、家畜疫病、農(nóng)藥殘留、食品安全等多個(gè)方向，因此該技術(shù)具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景。

因此，基于當(dāng)前形勢(shì)的迫切需要，亟需提供一種方便、快捷且敏感度高的檢測(cè)方法，即研制開發(fā)一種快速檢測(cè)糧食、飼料中的黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙盒及其制備方法，造福于人類，將是該技術(shù)領(lǐng)域科研人員急需深入研究開發(fā)的新課題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種應(yīng)用效果顯著的黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙盒及其制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的實(shí)施方式如下：一種黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙盒，包括塑料殼體和置于其中的試紙條；所述塑料殼體設(shè)有加樣孔和觀測(cè)孔；其特征在于：所述試紙條用聚氯乙烯(PVC)作背襯，設(shè)有的膠體金試紙條主要由四部分組成：

(1)在試紙條加樣區(qū)粘貼樣品墊；

(2)在樣品墊之下，硝酸纖維素膜之上粘貼吸附膠體金抗黃曲霉毒素AFB₁單克隆抗體結(jié)合物的玻璃纖維膜(結(jié)合墊)，樣品墊與玻璃纖維膜連接處有3mm重疊區(qū)；

(3)在試紙條中間的測(cè)試區(qū)粘貼硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜檢測(cè)線(T線)區(qū)包被黃曲霉毒素AFB₁-OVA復(fù)合物，質(zhì)控線(C線)區(qū)包被羊抗鼠IgG抗體，然后再用1％牛血清白蛋白封閉硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜位于玻璃纖維膜之下，硝酸纖維素膜和玻璃纖維膜連接處2mm重疊區(qū)；

(4)在試紙條另一端粘貼吸水紙，吸水紙位于硝酸纖維素膜上端，吸水紙與硝酸纖維素膜的連接處有2mm重疊區(qū)。