[發(fā)明專利]一種動物干擾素的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910303630.5
• 申請日: 2009-06-25
• 公開（公告）號: CN102154418A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設計）人: 王文彪;王麗莉
• 申請（專利權）人: 天津艾森生物工程有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 閆俊芬

技術領域

本發(fā)明屬于動物醫(yī)藥領域，特別涉及一種制備動物干擾素的方法。

背景技術

雞病毒性疾病仍是當前嚴重制約養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的主要傳染病。而傳統(tǒng)的傳染病治療方案臨床上有時難以湊效，尤其針對病毒病辦法不多。雞病毒性疾病至今尚無有效的治療藥物和治療方法。近年來曾經(jīng)有人進行過用中草藥制劑預防和治療雞病毒性疾病的試驗，但治愈率較低。抗生素及磺胺類藥物基本無效。目前，雞干擾素是治療雞病毒性疾病的有效藥物。

存在的問題是：在雞干擾素的生產(chǎn)中使用常規(guī)用雞新城疫病毒(NDV)誘導雞脾白細胞產(chǎn)生干擾素含量較低，但沒有人用仙臺病毒作為干擾素誘導劑。另外采集無菌雞脾比較困難。

黃芪多糖是一種具有新型免疫調(diào)節(jié)作用物質(zhì)，能刺激人體免疫系統(tǒng)的功能，誘生和促生干擾素產(chǎn)生，也是一種的雞脾淋巴細胞調(diào)節(jié)素。黃芪多糖具有增強免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗放射、保肝、催眠等廣泛的藥理活性，能誘生與促誘生人血細胞產(chǎn)生干擾素-a(IFN-a)，干擾素-r(IFN-r)，雞脾淋巴細胞介素-2(IL-2)，雞脾淋巴細胞介素-6(IL-6)，腫瘤壞死因子-a(TNF-a)，與粒一巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)等多種細胞活性因子。黃芪多糖是一種新型的生物反應調(diào)節(jié)劑，具有間接抗病毒、抗腫瘤作用。

但有關利用仙臺病毒和黃芪多糖作復合干擾素誘導劑高效制備干擾素的方法目前還未見報道。

因此，提供一種簡單工藝方法生產(chǎn)含量高、制備成本低的高效生產(chǎn)動物干擾素的方法，是該技術領域科研人員急需開發(fā)的新課題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述技術中的不足之處，提供一種動物干擾素的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的技術方案如下：

一種動物干擾素的制備方法，具體實施步驟如下：

(1)無菌采取實驗雞脾臟，用脾臟制備淋巴細胞懸液，加入10μg/ml卡那霉素，用配置好的培養(yǎng)液稀釋淋巴細胞懸液，使雞脾淋巴細胞濃度稀釋為每ml含1×10⁵-1×10⁷；；

(2)對淋巴細胞單層進行傳代培養(yǎng)；

(3)雞脾淋巴細胞中加入少量干擾素，使其最終濃度為100-1000IU/ml，于37℃水浴培養(yǎng)0.5-2小時；

(4)再加入黃芪多糖，使其最終濃度為25-100μg/ml，于37℃水浴培養(yǎng)1-2小時；

(5)然后在上述雞脾淋巴細胞懸液中再加入適量干擾素誘生劑仙臺病毒，使其最終濃度為128-1280血凝單位/ml，37℃搖床培養(yǎng)18-24小時；

(6)待干擾素達到高峰值時，離心收集上清，加入鹽酸調(diào)至pH2.0，4.0℃，放置1-4天，滅活病毒，再加NaOH調(diào)至pH?7.0，即得粗制動物干擾素。

本發(fā)明的有益效果是：雞基因工程干擾素具有制備成本高，在臨床推廣中受到很到限制。本發(fā)明利用雞脾制備動物干擾素的方法：其具有很多優(yōu)點：生產(chǎn)工藝簡單、制備成本低，療效好。常規(guī)用NDV-F誘導雞脾淋巴細胞產(chǎn)生干擾素含量低。

本發(fā)明在仙臺病毒誘導干擾素過程中加入黃芪多糖，顯著提高利用雞脾制備動物干擾素的含量，顯著降低了藥物的成本。本產(chǎn)品注入雞機體后，具有療效好、安全可靠、用量低、無毒副作用和成本低等優(yōu)點。

具體實施方式

以下結合實施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實施方式詳述如下：

實施例1

一種動物干擾素的制備方法的具體步驟如下：

(1)雞脾淋巴細胞制備

無菌采取實驗雞脾臟，用脾臟制備淋巴細胞懸液，加入10μg/ml卡那霉素，用配置好的培養(yǎng)液稀釋淋巴細胞懸液，使雞脾淋巴細胞濃度稀釋為每ml含1×106。雞脾淋巴細胞的分離應在采集后48小時內(nèi)進行。活細胞數(shù)應達到90％以上。并對淋巴細胞單層進行傳代培養(yǎng)；使雞脾淋巴細胞濃度稀釋為每ml含1×10⁶。雞脾淋巴細胞的分離應在制備后48小時內(nèi)進行。活細胞數(shù)應達到90％以上。

(2)誘生病毒

采用仙臺病毒，血凝效價達到適宜滴度方可投產(chǎn)。

(3)培養(yǎng)液

采用細胞培養(yǎng)基RPMI-1640，內(nèi)含5-10％牛血清和10μg/ml卡那霉素或慶大霉素，也可用其它適宜培養(yǎng)液。

(4)生產(chǎn)用原水應符合飲用水標準，直接用于制品的水應符合注射用水標準。

(5)粗制干擾素的制備工藝

(5.1)誘生病毒的制備