[發(fā)明專利]一種使用同一份臍帶血的血清來(lái)收獲干細(xì)胞的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910301568.6
• 申請(qǐng)日: 2009-04-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101525596A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉天慶;殷軼群;關(guān)水;鮑春雨;葛丹;李香琴;崔占峰;馬學(xué)虎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/08
• 分類號(hào): C12N5/08
• 代理公司: 大連理工大學(xué)專利中心
• 代理人: 梅洪玉

1.一種使用同一份臍帶血的血清來(lái)收獲干細(xì)胞的方法，其特征在于以下步驟：

(1)分離人臍帶血單核細(xì)胞：臍帶血來(lái)自健康產(chǎn)婦足月分娩或足月剖腹產(chǎn)嬰兒，每次臍帶血采集量平均為50～100mL；臍帶血采集后，按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻，用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細(xì)胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后獲得單核細(xì)胞，F(xiàn)icoll細(xì)胞分離液與臍帶血的體積比為1∶1～1∶2；分離后的細(xì)胞用IMDM基礎(chǔ)培養(yǎng)基1000rpm、5分鐘離心洗滌兩次，調(diào)整細(xì)胞密度備用；

(2)獲得同一份臍帶血血清：臍帶血采集后，按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻，用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細(xì)胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后，收獲單核細(xì)胞；然后用滴管吸取第一層血清液，置入無(wú)菌離心管中備用；

(3)cytodex-3微載體的預(yù)處理：將干燥的cytodex-3微載體置于硅化處理的玻璃瓶中，并用不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液在室溫下浸泡4小時(shí)以上，偶爾攪拌；用新的不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液沖洗兩次后，高壓滅菌備用；

(4)共培養(yǎng)UCB-HSCs與UCB-MSCs：將分離得到的UCB-MNCs以2×106cells.mL-1的密度接種到提前鋪滿cytodex-3微載體的24孔板中，添加20％的臍帶血血清；采用自然沉降的方法將懸浮的UCB-HSCs和粘附在GCSC微載體上的UCB-MSCs分離并收獲。