[發明專利]一種使用同一份臍帶血的血清來收獲干細胞的方法

無效

• 申請號: 200910301568.6
• 申請日: 2009-04-15
• 公開（公告）號: CN101525596A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 劉天慶;殷軼群;關水;鮑春雨;葛丹;李香琴;崔占峰;馬學虎
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 大連理工大學專利中心
• 代理人: 梅洪玉

1.一種使用同一份臍帶血的血清來收獲干細胞的方法，其特征在于以下步驟：

(1)分離人臍帶血單核細胞：臍帶血來自健康產婦足月分娩或足月剖腹產嬰兒，每次臍帶血采集量平均為50～100mL；臍帶血采集后，按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻，用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后獲得單核細胞，Ficoll細胞分離液與臍帶血的體積比為1∶1～1∶2；分離后的細胞用IMDM基礎培養基1000rpm、5分鐘離心洗滌兩次，調整細胞密度備用；

(2)獲得同一份臍帶血血清：臍帶血采集后，按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻，用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后，收獲單核細胞；然后用滴管吸取第一層血清液，置入無菌離心管中備用；

(3)cytodex-3微載體的預處理：將干燥的cytodex-3微載體置于硅化處理的玻璃瓶中，并用不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液在室溫下浸泡4小時以上，偶爾攪拌；用新的不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液沖洗兩次后，高壓滅菌備用；

(4)共培養UCB-HSCs與UCB-MSCs：將分離得到的UCB-MNCs以2×106cells.mL-1的密度接種到提前鋪滿cytodex-3微載體的24孔板中，添加20％的臍帶血血清；采用自然沉降的方法將懸浮的UCB-HSCs和粘附在GCSC微載體上的UCB-MSCs分離并收獲。