[發(fā)明專利]一種使用同一份臍帶血的血清來(lái)收獲干細(xì)胞的方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910301568.6 | 申請(qǐng)日: | 2009-04-15 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN101525596A | 公開(kāi)(公告)日: | 2009-09-09 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 劉天慶;殷軼群;關(guān)水;鮑春雨;葛丹;李香琴;崔占峰;馬學(xué)虎 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 大連理工大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12N5/08 | 分類號(hào): | C12N5/08 |
| 代理公司: | 大連理工大學(xué)專利中心 | 代理人: | 梅洪玉 |
| 地址: | 116085遼*** | 國(guó)省代碼: | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書(shū): | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū): | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 使用 一份 臍帶血 血清 收獲 干細(xì)胞 方法 | ||
1.一種使用同一份臍帶血的血清來(lái)收獲干細(xì)胞的方法,其特征在于以下步驟:
(1)分離人臍帶血單核細(xì)胞:臍帶血來(lái)自健康產(chǎn)婦足月分娩或足月剖腹產(chǎn)嬰兒,每次臍帶血采集量平均為50~100mL;臍帶血采集后,按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻,用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細(xì)胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后獲得單核細(xì)胞,F(xiàn)icoll細(xì)胞分離液與臍帶血的體積比為1∶1~1∶2;分離后的細(xì)胞用IMDM基礎(chǔ)培養(yǎng)基1000rpm、5分鐘離心洗滌兩次,調(diào)整細(xì)胞密度備用;
(2)獲得同一份臍帶血血清:臍帶血采集后,按體積比1∶1與PBS緩沖鹽溶液混合均勻,用密度為1.077g.mL-1的Ficoll細(xì)胞分離液以2500rpm、25分鐘密度梯度離心后,收獲單核細(xì)胞;然后用滴管吸取第一層血清液,置入無(wú)菌離心管中備用;
(3)cytodex-3微載體的預(yù)處理:將干燥的cytodex-3微載體置于硅化處理的玻璃瓶中,并用不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液在室溫下浸泡4小時(shí)以上,偶爾攪拌;用新的不含Ca2+、Mg2+離子的PBS緩沖鹽溶液沖洗兩次后,高壓滅菌備用;
(4)共培養(yǎng)UCB-HSCs與UCB-MSCs:將分離得到的UCB-MNCs以2×106cells.mL-1的密度接種到提前鋪滿cytodex-3微載體的24孔板中,添加20%的臍帶血血清;采用自然沉降的方法將懸浮的UCB-HSCs和粘附在GCSC微載體上的UCB-MSCs分離并收獲。
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