[發明專利]一種檢測精子DNA碎片的方法及裝置

無效

• 申請號: 200910301318.2
• 申請日: 2009-04-02
• 公開（公告）號: CN101525670A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 劉瑜
• 申請（專利權）人: 劉瑜
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/34;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司
• 代理人: 張學群

1.一種檢測精子DNA碎片的裝置，其特征在于，它包括：

（1）包被固相：在載片或容器上包被有高熔點凝膠的固相；所述高熔點 凝膠的熔點為40～100℃;

（2）固封于密封管內的凝膠；其內的凝膠為低熔點凝膠，其熔點為25～60 ℃；

（3）變性液：用來使精子變性以產生單鏈DNA的酸性水溶液；

（4）溶解液：用來溶解去除精子核蛋白的含巰基試劑的三羥甲基氨基甲 烷緩沖液；

（5）用來指示反應后精子DNA碎片化狀況的染色液;

所述凝膠是聚丙烯酰胺凝膠或聚乙烯醇型凝膠或瓊脂或瓊脂糖或瓊脂糖 衍生物或葡聚糖凝膠或葡聚糖衍生物凝膠；

所述溶解液pH值為7.0～9.0，其組分包括：巰基試劑的濃度含量為 0.01～2.8摩爾/升、離子去垢劑的重量含量為0.05～1.5%，非離子去垢劑的體 積含量為0.01～3.5%；

所述巰基試劑是半胱氨酸、二硫赤蘚糖醇、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、 谷胱甘肽、2,3-二巰基丙醇中的一種或幾種的混合；

所述離子去垢劑是3-[(3-膽烷酰胺丙基)-二甲銨]-1-丙磺酸鹽、3-[(3-膽烷 酰胺丙基)-二甲銨]-2-羥-1-丙磺酸鹽、十二烷基肌氨酸鈉、十二烷基硫酸鈉、 溴化十六烷基吡啶、十六烷基三甲基溴化銨、Zwittergent中的一種或幾種的 混合；

所述非離子去垢劑是Tween-20、Tween-60、Tween-80、Brij35、Brij56、 Brij58、TritonX-100、TritonX-114、NonidetP40中的一種或幾種的混合。

2.根據權利要求1所述的檢測精子DNA碎片的裝置，其特征在于：

還包括用于提取高活力精子和調整精子濃度的培養液。

3.根據權利要求1所述的檢測精子DNA碎片的裝置，其特征在于：

所述包被固相用的包被液中含Tris或磷酸鹽緩沖液，包被液的pH值為 7.0～9.0；

所述密封管是帶蓋的，低熔點凝膠水溶液的pH值為7.0～9.0。

4.根據權利要求1所述的檢測精子DNA碎片的裝置，其特征在于：

所述酸性水溶液是冰乙酸、乙酸、鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸中的一種或 幾種的混合，其中，pH0.1～4.0，酸濃度為0.02～0.2摩爾/升。

5.根據權利要求1所述的檢測精子DNA碎片的裝置，其特征在于：

所述染色液選用熒光染色液,并配有熒光封固液，該封固液采用對苯二 氨重量含量為0.05～0.5%和甘油體積含量為5～50%的磷酸鹽緩沖液，其pH為 7.5～9.0，該封固液中還含有適量的抑制細胞生長的防腐劑。