[發明專利]一種缺失gG和TK基因的重組牛傳染性鼻氣管炎病毒和應用

有效

• 申請號: 200910273357.6
• 申請日: 2009-12-24
• 公開（公告）號: CN101818130A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 郭愛珍;張敏敏;劉正飛;付書林;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/265;A61P31/20;C12N7/01;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于動物基因工程技術領域，具體涉及雙基因缺失的一種重組牛傳染性鼻氣管炎病毒，該病毒 缺失了gG和TK基因，該毒株的毒力降低而免疫原性沒有影響，本發明還包括利用該重組病毒制備牛傳 染性鼻氣管炎病毒疫苗以及該疫苗的應用。

背景技術

牛傳染性鼻氣管炎(Infectious?Bovine?Rhinotracheitis，IBR)，又稱“壞死性鼻炎”或“紅鼻病”，是由 牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious?Bovine?Rhinotracheitis?viruses，IBRV)，引起的牛的一種急性、熱性、 接觸性傳染病，該病的危害性在于病毒侵入牛體后，可潛伏于一定部位，導致持續性感染，病牛長期乃至 終生帶毒，在機體抵抗力下降時，又向外排毒。該病對奶牛的產奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均 有較大的影響，而且急性呼吸道感染可繼發牛致命性細菌性肺炎，是造成養牛業經濟損失的主要原因之一。 該病在世界范圍內流行，并且每年都給養牛業造成巨大的經濟損失。目前只有少數歐洲國家已經根除了本 病，其他一些國家正在實施撲滅計劃，或使用標記疫苗區分自然感染和疫苗免疫的牛群，以便于更 好的進行監控和防制。

IBRV為有囊膜的雙股DNA病毒，病毒粒子呈圓球型，成熟病毒粒子直徑約150-220nm，主要由核 心、衣殼和囊膜組成。核心由雙股DNA和蛋白質纏繞而成，其核衣殼為立體對稱的二十面體，外觀呈六 角形，上面有162個殼粒，周圍為一層含脂質的囊膜。雙股DNA分子量為84×10⁶，其中G+C含量為72％。

據測IBRV基因組可編碼大約70個蛋白質，其結構和功能目前大部分已知(李繼昌，牛傳染性鼻氣管炎 病的研究進展，黑龍江畜牧獸醫.2002，4：50)，其中含有25～33種結構蛋白。存在于病毒囊膜的gB、gC、 gD和gE四個主要糖蛋白基因已經測序并在原核和哺乳動物中表達。IBRV糖蛋白能刺激機體產生中和抗體， 并且在補體的存在下使感染細胞裂解。gB、gC、gD和gE四個基因主要負責病毒的吸附、滲透和在細胞之 間擴散病毒(Belknap?EB，Walters?LM.，Kelling?C，Ayers?VK，NorrisJ，McMillen?J，Hayhow?C，Cochran?M， Reddy?DN，Wright?J，Collins?JK.Immunogenicity?and?protective?effcacy?of?a?gE，gG?and?US2?gene-deleted bovine?herpesvirus-1(BHV-1)vaccine.Vaccine，1999，17(18)：2297-2305)，gB、gC、gD是刺激宿主免疫應答 的主要抗原蛋白(Tikoo?SK，Campos?M，Babiuk?LA.Bovine?herpesvirus?1(BHV-1)：biology，pathogenesis，and control.Adv.Virus?Res，1995，45：191-223)，gD能誘導產生最高水平的體液和細胞免疫(Babiuk?LA，van Drunen?Littel-van?den?Hurk?S，Tikoo?SK，Lewis?PJ，Liang?X.Novel?viral?vaccines?for?livestock.Vet.Immunol Immunopathol，1996，54(1-4)：355-363)。

gB：gB能引起細胞融合，在哺乳動物細胞中的表達顯示出引起細胞融合和多核體的形成，對病毒復制 是必需的，國內學對其實現了原核表達并對表達產物的抗原性進行了分析，在桿狀病毒中表達的抗原性較 gC、gD弱；細胞表面的糖蛋白相互作用，介導病毒吸附的起始，可能調控病毒的數個反式激活子的結合作 用，但對病毒的感染并非必需；糖蛋白gB對于穿孔是必需的，并且已經證實侵襲神經和通過神經傳播需要 gB。

gC：gC是BHV-1表達最多的糖蛋白，并且在病毒粒子表面即體液中和抗體和細胞毒性T細胞反應的有 效部位能夠形成最清晰的影象。它對病毒吸附組織培養細胞是重要的，但它在牛細胞內的表達并不影響病毒 蝕斑的數量和病毒的存在。此外，gC促進病毒的穿透即病毒進入細胞的第二過程，也可能參與病毒復制的 其他過程。BHV-1、HSV-1和IBRV的gC蛋白與細胞表面的糖蛋白相互作用，介導病毒吸附的起始，還能夠 誘導細胞介導的免疫應答。