[發明專利]一種結核分枝桿菌的試劑盒及其檢測方法無效
| 申請號： | 200910273042.1 | 申請日： | 2009-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN102081091A | 公開（公告）日： | 2011-06-01 |
| 發明（設計）人： | 章曉聯;李瑩瀅 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/52;G01N21/31;C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430072*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 結核 分枝桿菌 試劑盒 及其 檢測 方法 | ||
1.一種結核分枝桿菌的試劑盒，其特征是該試劑盒包括：酶標板，生物素標記核酸適配子，辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素及其顯色底物；
所述的生物素標記核酸適配子NK2：將NK2序列合成，生物素標記NK2的5’端為：bio-NK2，并用無菌雙蒸水稀釋為400nM的濃度，-20℃保存。
2.一種結核分枝桿菌的試劑盒檢測結核分枝桿菌的方法，其步驟是：
A、將待檢樣品，痰液或血液或體液或細菌1000CFU/mL/痰液加在96孔酶標板，100μl/孔，4度孵育過夜；
B、含有5/10000吐溫-20的PBS，PBS溶液：NaCl?8g，KCl?0.2g，Na2HPO41.44g，KH2PO4?0.24g，加去離子水溶解，定容至1000ml，調pH至7.4，15磅滅菌20min，置4℃保存，洗滌六遍；
C、1％g/ml牛血清白蛋白PBS溶解，封閉96孔板，100μl/孔，37度封閉1小時；
D、用含有5/10000吐溫-20的PBS，洗滌六遍；
E、加入bio-NK2，400nM/孔，PBS稀釋，37度孵育1小時；
F、含有5/10000吐溫-20的PBS，洗滌六遍；
G、加入加辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素1∶1000，PBS稀釋，100μl/孔，37度孵育1小時；
H、含有5/10000吐溫-20的PBS，洗滌六遍；
J、加入底物顯色劑，顯色2分鐘，用2M濃硫酸中止顯色；
K、1小時內在多功能酶標儀450nM下檢測吸光度；
所述的底物顯色劑配方包括：A底物是：TMB?20mg，先用無水乙醇10ml溶解，充分振蕩，加雙蒸水定容到100ml；B底物是：取1水檸檬酸2.1g，無水Na2HPO4?2.82g，0.75％的過氧化氫0.64ml，雙蒸水定容至100ml，A底物與B底物各取5ml混勻。
3.權利要求1所述的一種結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于：所述的生物素標記核酸適配子NK2，其序列為SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。
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