[發明專利]人TFF3的ELISA檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200910272629.0
• 申請日: 2009-11-05
• 公開（公告）號: CN101706497A
• 公開（公告）日: 2010-05-12
• 發明（設計）人: 彭進洪;蘭萍
• 申請（專利權）人: 武漢三鷹生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及多種生物制劑——人TFF3蛋白質、抗TFF3的特異性多抗、單抗，和一種用于人源TFF3含量檢測的ELISA檢測試劑盒，適用于人組織、細胞培養物或血清中TFF3的定量檢測。

背景技術

TFFs(The?trefoil?factor?families)即三葉因子家族，是一類產粘蛋白的上皮細胞表面的一種分泌型多肽，因為其蛋白質均包含一個或多個由38至39個氨基酸殘基通過內部6個半胱氨酸殘基形成的3個二硫鍵而構成的三葉型結構而得名。

TFFs的基因位于21q22.3染色體上，家族中所有三個蛋白質的基因所占區域共55kb。TFFs在人體內多個組織里表達，但在胃腸道中表達量最大。

腸道炎癥和前列腺癌癥患者血清中，TFFs含量明顯上升(Vestergaard?EM，et?al.Plasmalevels?of?trefoil?factors?are?increased?in?patients?with?advanced?prostate?cancer.Clin?Cancer?Res.，2006；12：807-12)。TFFs被認為是維護黏膜表面健康的關鍵因子，后者炎癥時TFFs含量顯著上升，其作用機理被解釋為通過與粘蛋白的相互作用增強細胞的遷移從而提高黏膜表層的保護能力。雖然也有研究指出TFFs在多種癌癥病例中含量升高，但是這些蛋白質實現功能的機理還有待深入研究。

該家族有3個成員：TFF1、TFF2和TFF3。TFF1含60個氨基酸殘基，與乳腺癌相關；TFF2含106個氨基酸殘基，具解痙攣功能；TFF3含73個氨基酸殘基。其中，TFF1和TFF3包含一個、TFF2包含兩個三葉構型的結構域，且TFF1和TFF3可以通過位于羧基端的半胱氨酸殘基形成同源二聚體。

TFF3，亦稱為腸三葉因子(intestinal?trefoil?factor)，由于其緊密的三葉草結構，故而對蛋白酶、酸、熱穩定。TFF3單體分子量約8kDa，二聚體約15.6kDa。TFF3主要定位在胃上，也大量表達在小腸和大腸的黏膜細胞內。腸細胞中TFF3的生理效應被認為有利于癌細胞的生長、增殖和轉移。TFF3在健康捐贈者血清中的濃度為0.7ng/mL至2ng/mL(Vestergaard?EM，et?al.Development?and?Evaluation?of?an?ELISA?for?Human?Trefoil?Factor?3.Clin.Chem.，2002；48：1689-1695)。臨床數據顯示TFF3的表達可與胃癌的不良預后呈現關聯(Yamachika?T?et?al.Intestinal?Trefoil?Factor?A?Marker?of?Poor?Prognosis?in?Gastric?Carcinoma.Clin.Cancer?Res.，2002；8：1092)。此外，通過與粘蛋白的相互作用，TFF3可以使腸表層細胞避開眾多有害因子的影響。鼠的體內研究顯示，口服TFF3可使其避免胃黏膜傷害，抵御非類固醇類藥物誘發的損傷，而TFF3基因敲除鼠的黏膜修復功能明顯受損，當它們腸道受損時，死于傷口無法愈合，TFF3的作用機制包括維護上皮細胞，使其免于凋亡，或者誘使邊緣細胞(bordering?cell)遷移并覆蓋傷口，或者阻止經傷口進入上皮細胞的血清補體系統成分的沉積(Mashimo?H，et?al.ImpairedDefense?of?Intestinal?Mucosa?in?Mice?Lacking?Intestinal?Trefoil?Factor[J].Science，1996；274：262-265.)。

因此，對TFF3的定量分析有助于揭示其在胃腸道中的作用。

此外，也有報道，TFF3在乳腺癌、結腸癌、胃癌和前列腺癌癥患者血清中異常上調(Gronbaek?H，et?al.Serum?trefoil?factors?in?patients?with?inflammatory?bowel?disease.Digestion，2006；74：33-39)。

鑒于TFF3在血清或組織和細胞中濃度的上升為胃腸道病變發生的先兆，同時也與乳腺癌、結腸癌、胃癌和前列腺癌的病理發生和預后相關，因此，加強TFF3在血液、組織和細胞中的檢測具有研究價值和臨床意義。