[發明專利]一種改良的酚-氯仿法提取真菌DNA

有效

• 申請號: 200910263437.3
• 申請日: 2009-12-16
• 公開（公告）號: CN102102098A
• 公開（公告）日: 2011-06-22
• 發明（設計）人: 湯承;岳華;王曉佳
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種改良的酚-氯仿法提取真菌DNA，該方法的特征是成本低廉、操作簡便、需要樣本用量少、得率高，適于酵母樣真菌和絲狀真菌DNA的提取。

2.權利要求1所述的真菌DNA提取方法的試劑制備方法其特點是：

STE緩沖液：將1.169g?NaCl、2.422g?Tris、3.632g?EDTA溶于200ml去離子水調節PH值至8.0。常溫保存備用。

苯酚/氯仿/異戊醇混合液：苯酚/氯仿/異戊醇三種試劑按照25/24/1的體積比例混合常溫備用。

氯仿/異戊醇混合液：氯仿/異戊醇兩種試劑按照24/1的體積比例混合常溫備用。

3.權利要求1所述的真菌DNA提取方法的應用其特點是：

1)、液氮研磨干燥的真菌樣本(樣本量不少于75mg)，將研磨成粉末狀的真菌樣本收集到1.5ml?EP管中，加入500ml?STE緩沖液、30μl蛋白酶K、30μl?10％SDS，于54℃消化6-8h。

2)、加入500μl苯酚/氯仿/異戊醇混合液，振蕩至出現絮狀物，10000r/min離心4min。

3)、取上清至另一1.5ml?EP管中，加入500μl氯仿/異戊醇混合液，振蕩混勻后10000r/min離心4min。

4)、取上清至新1.5ml?EP管中，加入30μl?NaCl溶液(5mol/L)、800μl無水乙醇，混勻后于-20℃放置6-10h，10000r/min離心4min。

5)、保留沉淀加入600μl乙醇(70％)，混勻后10000r/min離心4min。

6)、棄上清后，將沉淀中的乙醇充分揮發干凈后加入50μl-100μl的無菌水溶解4℃保存。