[發明專利]增強免疫反應的人半乳凝素-9缺失體的制備及應用

有效

• 申請號: 200910260048.5
• 申請日: 2009-12-24
• 公開（公告）號: CN101792489A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 黎燕;沈倍奮;韓根成;李育蓉;馮健男
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/19;C12N1/21;A61K38/17;A61P37/04;C12R1/19;C12R1/645
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技術領域：

本發明涉及一種蛋白制備方法以及應用。具體而言，該蛋白是一種 人半乳凝素-9的缺失體，由人半乳凝素-9的C端的129個氨基酸序列 所組成，通過釣取人半乳凝素-9的C端基因，構建其原核表達系統，分 離純化而制備。所述蛋白具備促進DC細胞及巨噬細胞活化功能，表現為 增強細胞免疫反應，而缺失了人半乳凝素-9全蛋白的免疫抑制作用。所 述蛋白可以應用于抗病毒、抗感染藥品的生產中。

背景技術：

半乳凝素(galectin)存在于各種生物體內，不僅分布于細胞核，也 分布于細胞質乃至細胞外基質。人半乳凝素-9(Gal-9)作為家族成員 之一，除了能誘導嗜酸粒細胞聚集和活化外，還介導細胞分化、凋亡、 黏附、細胞間聚集、炎癥反應的調控和腫瘤轉移等。編碼Gal-9的基因 于人類染色體定位在17ql?1.1，包含11個外顯子，轉錄本長度約為1.7kb。 其編碼蛋白大約為36kDa，包含兩個同源的糖識別結構域(cabohydrate recognition?domain，CRD)，兩者由一條肽鏈將其相連[Lipkowitz?MS， Leal-Pinto?E，Cohen?BE，et?al.galectin?9?is?the?sugar-regulated urate?transporter/channel?UAT[J].Glycoconj?J，2004，19(7-9)： 491-498.]。Gal-9在組織中分布廣泛，已在人的肝臟、小腸、胸腺、 腎臟、脾臟、肺臟、心肌和骨骼肌等組織內發現。

通過結合表達于不同細胞表面的Tim-3分子，Gal-9蛋白分別發揮促 進非特異性免疫反應及下調特異性免疫應答的雙向調節作用。具體的作 用機制包括Gal-9分子一方面在免疫反應初始階段通過促進DC等炎癥細 胞的活化增強免疫反應、而另一方面在免疫反應效應階段通過抑制Th1 細胞活性而雙向調節體內的免疫反應[Nobumoto?A，Galectin-9expands unique?macrophages?exhibiting?plasmacytoid?dendritic?cell-like phenotypes?that?activate?NK?cells?in?tumor-bearing?mice.Clin Immunol.；130(3)：322-30.Anderson??AC，Promotion?of?tissue inflammation?by?the?immune?receptor?Tim-3?expressed?on?innate immune?cells.Science.2007；318(5853)：1141-3.]。Gal-9通過表達于 DC、巨噬細胞等炎癥細胞以及活化的T細胞表面的Tim-3分子發揮作用。 在自身免疫病中，Gal-9/Tim-3分子可以通過抑制T細胞的活性而緩解疾 病的進程[Chou?FC.Attenuation?of?Th1?response?through?galectin-9 and?T-cell?Ig?mucin?3?interaction?inhibits?autoimmune?diabetes?in NOD?mice.Eur?J?Immunol.2009.]，但在用外源Gal-9干預的過程中 也存在激活體內炎癥細胞的潛在危害；另一方面，Gal-9/Tim-3相互作用 可以通過增強DC細胞活性促進抗病毒及抗腫瘤免疫，但Gal-9/Tim-3對 T細胞的抑制則可能促進腫瘤或病毒的免疫逃避[Sharvan?Sehrawat. Role?of?Tim-3/Galectin-9?Inhibitory?Interaction?in?Viral-Induced Immunopathology：Shifting?the?Balance?toward?Regulators.The Journal?of?Immunology，2009，182：3191.Jihe?ne?Klibi.Blood diffusion?and?Th1-suppressive?effects?of?galectin-9-containing exosomes?released?by?Epstein-Barr?virus-infected?nasopharyngeal carcinoma?cells.Blood.2009；113：1957.Keiko?Nagahara，Galectin-9 Increases?Tim-3+Dendritic?Cells?and?CD8+T?Cells?and?Enhances Antitumor?Immunity?via?Galectin-9-Tim-3?Interactions.The?Journal of?Immunology，2008，181：7660.]。Gal-9分子的雙向調節作用為該分 子的應用帶來不便。