[發明專利]一種用親和素/鏈親和素磁性復合微粒對生物分子進行免疫學檢測的方法

有效

• 申請號: 200910254438.1
• 申請日: 2009-12-22
• 公開（公告）號: CN101713779A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 崔亞麗;楊璐;陳超;耿婷婷
• 申請（專利權）人: 陜西北美基因股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/576
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 徐平

1.一種用親和素/鏈親和素磁性復合微粒對生物分子進行免疫學檢測的方 法，該方法用于非診斷目的，該方法包括以下步驟：

（1）抗體/抗原與親和素/鏈親和素磁性復合微粒的偶聯

將生物素化的抗體/抗原與偶聯緩沖液混合，加入親和素/鏈親和素磁 性復合微粒中，置于搖床，在4~37℃，100~300rpm條件下充分反應， 反應完后，置于磁性分離器上，磁性分離，棄上清；用清洗緩沖液清 洗后，磁性分離，棄上清；

（2）封閉

加入封閉液，在4~37℃，100~300rpm條件下，于搖床中反應1~2小時， 封閉親和素/鏈親和素磁性復合微粒表面未與抗體或抗原結合的空白位 點；磁性分離，棄上清，用清洗緩沖液清洗后，懸于保存緩沖液中備 用；

（3）與待測物結合

當待檢標本為抗原時，將待檢標本，酶標抗體/酶標抗原加入步驟（2 ）的產物中，在4~37℃，100~300rpm條件下，于搖床中反應15~30min ，使偶聯在親和素/鏈親和素磁性復合微粒表面的生物素化的抗體與之 反應，雙抗體夾心反應形成特異性生物素化抗體-抗原-酶標抗體的復 合物；競爭法反應形成生物素化抗體-抗原復合物和生物素化抗體-酶 標抗原復合物的混合物；用清洗緩沖液清洗，磁性分離，棄上清；

當待檢標本為抗體時，將待檢標本，酶標抗原/酶標抗體/酶標抗抗體 結合物加入步驟（2）的產物中，在4~37℃，100~300rpm條件下，于搖 床中反應15~30min，使偶聯在親和素/鏈親和素磁性復合微粒表面的生 物素化的抗原與之反應結合，雙抗原夾心反應形成特異性生物素化抗 原-抗體-酶標抗原復合物；競爭法反應形成生物素化抗原-抗體復合物 和生物素化抗原-酶標抗體復合物的混合物；間接法反應形成生物素化 抗原-抗體-酶標抗抗體復合物；用清洗緩沖液清洗，磁性分離，棄上 清；

（4）檢測

向步驟（3）產物中加入顯色底物顯色或加入化學發光底物進行發光信 號檢測；

上述步驟（2）封閉液是游離生物素與牛血清白蛋白、小牛血清、脫脂 奶粉、乙醇胺或山羊血清中的任一種或多種成分的混合物；所述封閉 液的質量體積濃度為1~10%；

上述步驟（2）清洗緩沖液是

pH=7.0~9.0,濃度為0.005M~1M的Tris-HCl緩沖液、

pH=5.0~8.0,濃度為0.5×~10×的PBS緩沖液、

pH=3.6~5.6,濃度為0.005M~1M的醋酸鹽緩沖液、

pH=3.0~7.0,濃度為0.005M~1M的檸檬酸鹽緩沖液、

pH=9.0~11,濃度為0.005M~1M的CBS緩沖液、

pH=7.0~9.0,濃度為0.005M~1M的TBS緩沖液中的任一種或者是含0.02~ 0.2%吐溫的上述緩沖液；

上述步驟（2）保存緩沖液是

pH=7.0~9.0,濃度為0.005M~1M的Tris-HCl緩沖液、

pH=5.0~8.0,濃度為0.5×~10×的PBS緩沖液、

pH=3.6~5.6,濃度為0.005M~1M的醋酸鹽緩沖液、

pH=7.0~9.0,濃度為0.005M~1M的TBS緩沖液、

pH=3.0~7.0,濃度為0.005M~1M的檸檬酸鹽緩沖液、

pH=9.0~11,濃度為0.005M~1M的CBS緩沖液中的任意一種；

上述步驟（3）酶標抗體、酶標抗原、酶標抗抗體結合物是堿性磷酸酶 標記或辣根過氧化物酶標記的抗體、抗原、抗抗體結合物；清洗緩沖 液為0.005M~1M的Tris-HCl緩沖液或0.5×~10×的PBS緩沖液。