[發明專利]一種71型腸道病毒及其應用

有效

• 申請號: 200910249574.1
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN101717754A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 高正倫;張小梅;高強;劉玉芬;惠增弟;張卉;公雪杰;張建三;尹衛東
• 申請（專利權）人: 北京科興生物制品有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/125;A61K35/76;A61P31/14;C07K16/10;C12N15/02;C12N5/12;C12R1/93
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

本發明涉及一株腸道病毒71型(以下簡稱EV71)及其應用。具體而言，本發明涉 及一種通過蝕斑法分離的單克隆病毒株，其子代病毒表現為遺傳穩定，可用于人用疫 苗生產(尤其是嬰幼兒疫苗生產)。本發明的病毒株或由其生產的疫苗可用于預防由 EV71病毒引起的疾病(例如手足口病，尤其是兒童的手足口病)，且具有滴度穩定、 免疫原性強、免疫劑量小的特點。

背景技術

EV71屬于小RNA病毒科(Picornaradae)腸道病毒屬(Enterovirus)的成員， 歸屬于人類腸道病毒A。該病毒的顆粒為二十面體立體對稱的球形結構，無包膜和突 出，直徑約24～30nm，核酸為單股正鏈RNA。EV71病毒的基因組RNA中僅有一個開放 閱讀框(ORF)，編碼含2194個氨基酸的多聚蛋白。如同其他腸道病毒屬成員一樣， EV71基因組編碼分子量分別為34KD、30KD、26KD和7KD的多肽VP1、VP2、VP3、VP4。 這些多肽組成原聚體，然后再拼裝成具有五聚體樣結構的亞單位。60個亞單位通過各 自的結構域相互連接，最終形成病毒的外殼。VP1、VP2和VP3三個多肽暴露在病毒外 殼的表面，而VP4包埋在病毒外殼的內側與病毒核心緊密連接，因而抗原決定簇基本 上位于VP1-VP3上。EV71病毒由于沒有類脂膜，所以它對乙醚、脫氧膽酸鹽、去污劑 以及弱酸有抵抗性。此外，該病毒還能抵抗70％乙醇和5％甲酚皂溶液等常見的消毒 劑，但是高溫(56℃，30min)處理和紫外線照射可以很快將病毒滅活，它對各種氧化 劑如高錳酸鉀、雙氧水、漂白粉等也很敏感。

EV71病毒的衣殼蛋白中，VP1是該病毒主要的中和決定因子，它直接決定病毒的 抗原性。由于VP1基因具有與病毒血清型完全對應的遺傳多樣性，VP1基因序列不僅 可作為腸道病毒屬內不同血清型分類的依據，并可作為小RNA病毒科內不同屬的分類 參考。因此VP1基因成了EV71基因分型和遺傳進化分析的最重要的對象。目前基于 VP1核苷酸序列的差異，可將EV71分為A、B、C等三個基因型，其中A型僅包括原型 株BrCr-CA-70；B型和C型又可進一步分為B1、B2、B3、B4以及C1、C2、C3和C4亞 型。

人是EV71病毒唯一的自然宿主，主要的傳染源為病人、健康攜帶者和隱性感染者。 EV71的傳染性強，傳播途徑復雜，流行強度大，傳播快，在短時間內即可造成大流行。

EV71引起的疾病的流行一年四季均可出現，常見于夏秋季，且有周期流行特點(間 隔2～4年)。下面簡單介紹一下EV71引起的疾病的流行歷史。

國際流行歷史

1974年，Schmidt等首次從美國加利福尼亞一例腦炎患兒的糞便標本中分離到 EV71，此后的幾十年，EV71已經在世界范圍內導致十幾次規模不等的流行，尤其是最 近十年在亞太地區的流行呈現上升趨勢。

1975年，保加利亞發生EV71大流行，共有705名患兒受到感染，其中545例為 無菌性腦膜炎，149例發生了急性松弛性癱瘓，68例出現延髓受損，死亡44例。低齡 兒童是本次流行的主要對象，93％的病例和83.8％的死亡病例發生在5歲以下人群。但 本次疫情未發現HFMD(手足口病)病例。

1978年，匈牙利發生EV71疫情，出現826例無菌性腦膜炎和724例腦炎病例， 其中332例經病毒培養或血清學檢驗證實為EV71感染。所述病例中有嚴重神經系統損 傷患者，包括13例脊髓灰質炎樣麻痹、145例腦炎、161例腦膜炎，死亡45例。本次 疫情發現4例HFMD病例。

1972～1973年和1978年，日本出現兩次EV71大流行，但病情表現相對溫和，除 少數為腦炎、松弛性麻痹、無菌性腦膜炎外，主要為HFMD病例。其后，日本出現多起 EV71的流行。1982年發生爆發流行，共計14萬余例病例。1997年，日本出現EV71 的局部流行。2000年日本再次出現EV71的流行。從1982年至2000年，只報道了零 星的死亡和重癥病例。

1997年，馬來西亞出現EV71疫情，共報告病例5999例，主要臨床表現為HFMD， 39例出現急性脊髓灰質炎樣麻痹或無菌性腦膜炎，死亡至少31例，死者平均年齡僅 1.5歲，病程僅2天。