[發明專利]一種樺褐孔菌及從樺褐孔菌中提取三萜類物質的方法

有效

• 申請號: 200910248615.5
• 申請日: 2009-12-22
• 公開（公告）號: CN101933460A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 劉宏生;朱春玉;郭立雄;宋雅娜;艾海新;鄭方亮;朱俊豐
• 申請（專利權）人: 遼寧大學
• 主分類號: A01H15/00
• 分類號: A01H15/00;C12P15/00
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地涉及一種樺褐孔菌及從樺褐孔菌中提取三萜類物質的方法。

本發明所稱的樺褐孔菌命名為：樺褐孔菌(Inonqqus?obliquusLNUF008)，已于2009年11月24日在中國典型培養物保藏中心保藏，編號為CCTCC?M?209280。

背景技術

樺褐孔菌Inonqqus?obliquus，國內還稱為樺癌褐孔菌、斜生纖孔菌。屬擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、刺革菌科。

樺褐孔菌的形態：它的子實體呈現腫瘤狀(不育性的塊狀物)，直徑25～40cm，深色，表面深裂，很硬，時脆。孢子闊橢圓狀至卵狀，光滑，有剛毛。菌絲為二系菌絲系統，具有生殖菌絲和骨架菌絲。氣生菌絲多為骨架菌絲，黃褐色，具有剛毛狀菌絲和稀少剛毛；基內菌絲多為生殖菌絲，淡黃褐色，有隔，無鎖狀聯合。

樺褐孔菌在俄羅斯、波蘭、芬蘭等地是一種應用很廣泛的藥用真菌，英文名chaga。1955年，chaga被俄羅斯醫學研究院用來治療腫瘤，特別是消化系統和肺部腫瘤。16世紀至今，東歐一些國家的民間就是用這種菌的菌核來防治癌癥。西伯利亞的Khhanty人用這種真菌來預防和治療心臟病、肝病、胃病和食道疾病等。近期研究表明，樺褐孔菌能抑制艾滋病等病毒(HIV-1)，抗輻射、并通過抑制蛋白質生物合成、抗有絲分裂及消除自由基活性等作用機制來抑制或延緩腫瘤細胞的生長和防治0-157大腸桿菌中毒。

但是，目前樺褐孔菌的使用主要以野生為主。野生的樺褐孔菌主要生長在俄羅斯的西伯利亞地區、日本北海道、芬蘭等地。在我國吉林長白上地區和黑龍江大小興安嶺地區有野生樺褐孔菌生長。而采用野生直接使用，其有效成分利用率低。三萜類物質在醫學上具有很高的應用價值，現有從樺褐孔菌中提取三萜類物質，提取率較低。

發明內容：

為了解決上述問題，本發明的目的是提供一種樺褐孔菌(Inonqqusobliquus?LNUF008)，于中國典型培養物保藏中心保藏，編號為CCTCC?M209280。以下簡稱樺褐孔菌LNUF008。采用此菌，三萜類物質的提取率高。

本發明的另一目的是提供一種從樺褐孔菌中提取三萜類物質的方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種樺褐孔菌，其特征在于：樺褐孔菌(Inonqqus?obliquus?LNUF008)，2009年11月24日于中國典型培養物保藏中心保藏，編號為CCTCC?M?209280。

本發明提供的樺褐孔菌LNUF008的篩選方法為：

自長白山野生林區采摘新鮮的樺褐孔菌子實體(直徑22.5cm)，在無菌間內分離菌絲體。首先，從子實體上剜下直徑5cm的塊，以75％的酒精表面消毒10min，用無菌水沖洗5～6次，0.1％的氯化汞表面消毒1～2min，用無菌水沖洗。用無菌刀將子實體塊劈開，用無菌剪從中心菌肉處剜取直徑0.5cm小塊，移至平皿培養基中，28℃培養5天。

待長出菌落后，將菌落挑入斜面培養基中，培養7天，至斜面長滿，得菌株LNUF008，將斜面于4℃冰箱保存。

菌株LNUF008的鑒定如下：

A.菌絲體外部形態觀察結果

將斜面中菌絲體接種至固體培養基平皿中央，28℃恒溫培養10天，肉眼逐日觀察菌絲體外觀形態變化。培養3天后，平皿中央菌塊周圍有白色絨狀菌絲出現；培養5天后，菌落不斷擴展，菌絲白色但逐漸加粗；培養7天后，菌落擴展到平皿1/2，菌絲體逐漸匍匐于培養基上，由白色逐漸變黃；培養10天后，菌落繼續擴展，菌絲體由黃色向棕色轉變，并有模糊的環紋出現，菌落表面有菌孔，并出現黃褐色液珠，如圖1。從表面形態觀察，此菌株LNUF008與樺褐孔菌極為相似。

B.菌絲體顯微結構觀察

利用載玻片培養觀察法對菌株LNUF008菌絲體進行觀察。菌絲為二系菌絲系統，具有生殖菌絲和骨架菌絲。氣生菌絲多為骨架菌絲，初為白色，寬2.5～4.0μm，具有剛毛狀菌絲；基內菌絲體多為生殖菌絲，淡黃褐色，寬3.0～5.0μm，有隔，無鎖狀聯合，如圖1。

C.菌株LNUF008的測序及進化樹的制作：