[發明專利]基因工程改造六-甲基水楊酸合成酶并組合生物合成螺環乙酰乙酸內酯類抗生素

有效

• 申請號: 200910247567.8
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN101812103A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 劉文;丁偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海有機化學研究所
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C12N9/00;C12N15/52;C12N15/76;C12P19/62;A61K31/7048;A61P31/04;A61P35/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

1.一種螺環乙酰乙酸內酯類抗生素，其特征是結構式如下：

式中R₁＝OH，R₂＝H；

或者R₁＝OH，R₂＝Cl。

2.一種通過基因工程改造6-MSAS來組合生物合成螺環乙酰乙酸內酯類抗生素的方 法，其特征是該方法包括：

1)在PCR引物中引入了6-MSAS的KR結構域的催化活性位點的Y突變成F 的突變位點，以含有KR片段的質粒為模板，PCR得到相應的KR片段，通過酶 切連接替代原來的KR結構域，并最終克隆到表達載體pTGV2中，構建成KR 點突變的6-MSAS的表達質粒；

2)將KR結構域定點突變的6-MSAS的表達質粒導入到Streptomyces?albus中異 源表達，在得到的重組菌株中產生OSA；

3)將6-MSA?KR結構域點突變后產生OSA的表達質粒導入到六-甲基水楊酸合 成酶基因中斷的氯絲菌素產生菌Streptomyces?antibioticus?DSM40725中，得到的 重組菌株發酵，發酵產物經分離純化得到權利要求1所述的螺環乙酰乙酸內酯類 抗生素；

其中6-MSAS代表六-甲基水楊酸合成酶，OSA代表苔色酸。

3.如權利要求2所述的方法，其特征是所述的重組產生OSAS是通過6-MSAS的KR 結構域催化活性位點1540位的Y突變成F相應的突變位點的序列；其中OSAS代 表苔色酸合成酶。

4.如權利要求2所述的方法，其特征是所述的重組產生OSAS是通過6-MSAS的KR結 構域催化活性位點1540位的Y突變成F相應的突變位點的序列為PCR引物構建成的表 達質粒導入到Streptomyces?albus和chlB1基因敲除的Streptomyces?antibioticus DSM40725得到的突變菌株。

5.如權利要求1螺環乙酰乙酸內酯類抗生素用于制備抗菌或抗腫瘤藥物。