[發明專利]一種小報春的花藥培養方法

有效

• 申請號: 200910244440.0
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN101766121A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 張啟翔;賈茵;潘會堂;孫明;程堂仁;董玲玲
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張慶敏

技術領域

本發明涉及植物組織培養，具體地說，涉及小報春(Primula forbesii?Franch.)的花藥培養方法。

背景技術

小報春(Primula?forbesii?Franch.)為我國特有的報春花科報春花 屬二年生草本植物，原產海拔1500～2000m的我國云南地區。小報春 (Primula?forbesii?Franch.)是典型的自交不親和(self-incompatibility) 植物，長期的異花授粉使其后代性狀分離廣泛，難以穩定遺傳。傳統 的雜交方法費時費力，育種周期較長。

為了縮短育種進程，盡快將優異的報春資源進行純化，穩定。需 要采用花藥培養的方法獲得小報春單倍體，形成一套完整的花藥培養 技術體系，為今后的單倍體加倍獲得雙單倍體的純合種質奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種小報春(Primula?forbesii?Franch.)的花 藥培養方法，以獲得小報春單倍體植株，通過單倍體育種途徑可快速 獲得純合材料，增加有益性狀的選擇幾率，加快育種進程。

本發明提供一種小報春的花藥培養方法，包括外植體的選擇、外 植體的消毒與接種、愈傷組織誘導與增殖、愈傷組織分化、組培苗生 根培養與移栽，其中，所述愈傷組織誘導與增殖的培養基為MS+6-BA 1.0mg/L+2，4-D?0.5mg/L，30g/L蔗糖，6g/L瓊脂，pH為5.9～6.0；所 述愈傷組織分化培養基為MS+6-BA?0.2mg/L+NAA?0.01mg/L，40g/L 蔗糖，7g/L瓊脂，pH為5.9～6.0；所述生根培養基為MS，pH為5.9～ 6.0。

所述的外植體為小報春稍露色的花藥；應選擇小孢子發育時期大 多處于單核靠邊期的花藥進行培養，此時從外觀上花蕾明顯膨大，花 瓣微露出花萼，長度在4.0-5.0mm之間。

所述愈傷組織誘導與增殖時，光照條件為人工輔助光1500～2000 Lux；溫度為24～26℃，光照時間12～14h/d。

所述愈傷組織分化時，光照條件為人工輔助光2000～3000Lux； 溫度為24～26℃，光照時間12～14h/d。

所述生根培養時，光照條件為人工輔助光2000～3000Lux；溫度 為24～26℃，光照時間12～14h/d。

所述組培苗的移栽溫度為18～25℃。

所述外植體采用流水下沖洗1h，70％(體積比)乙醇進行表面消 毒，消毒時間為30s，無菌水沖洗3～5次后，2％次氯酸鈉(重量比) 進行表面消毒，消毒時間控制在8～10min，無菌水沖洗3～5次。

所述組培苗經在生根培養基中培養2～3周后，煉苗3～4天移栽至 溫室細草炭土中培養。

本發明所述的小報春的花藥培養方法，具體為：選取小報春的稍 露色、長度在4.0～5.0mm之間的花藥為外植體，經流水下沖洗1h，70％ 乙醇進行表面消毒，消毒時間為30s，無菌水沖洗3～5次后，2％次氯 酸鈉進行表面消毒，消毒時間控制在8～10min，無菌水沖洗3-5次； 接種到花藥愈傷組織誘導培養基，MS+6-BA?1.0mg/L+2，4-D?0.5 mg/L，30g/L蔗糖，6g/L瓊脂，pH為5.9～6.0；光照條件為人工輔助 光1500～2000Lux；溫度為24～26℃，光照時間12～14h/d；之后移至 相同培養基進行增殖，繼代2～3次后轉入愈傷組織分化培養基， MS+6-BA?0.2mg/L+NAA?0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH為5.9～ 6.0；光照條件為人工輔助光2000～3000Lux；溫度為24～26℃，光照 時間12～14h/d；將分化的組培苗轉入生根培養基MS，pH為5.9～6.0； 光照條件為人工輔助光2000～3000Lux；溫度為24～26℃，光照時間 12～14h/d；生根培養2～3周，煉苗3～4天后，移至細草炭土中培養， 保持濕度高于80％，每天噴水2～3次。

組培苗移栽時的溫度應控制在18～25℃之間，過高或過低都不利 于組培苗的成活，夏季不宜進行組培苗的移栽。

一般來說，盛花期的小報春著花量很大，每株植株可以產生200 朵以上的花朵數量，因此花藥的取材十分充足。通過小報春(Primula forbesii?Franch.)花藥培養再生的組培苗生長良好。