[發明專利]一種檢測陰道分泌物中細菌菌群的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 200910244266.X
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN101792791A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 王加義;郭智芳;宋金才;張麗梅
• 申請（專利權）人: 北京中生金域診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;C12Q1/44;C12Q1/34;C12Q1/28;C12R1/445;C12R1/19;C12R1/46;C12R1/01
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.一種檢測陰道分泌物中細菌菌群的試劑盒，其包括：

1)反應裝置

所述反應裝置具有過氧化氫反應孔、唾液酸苷酶反應孔、白細胞 酯酶反應孔、β-葡萄糖醛酸酶反應孔和凝固酶反應孔；

2)一種或多種顯色劑；

3)樣品稀釋液；

其中，所述反應裝置的過氧化氫反應孔包被有辣根過氧化物酶和 二乙氨基對苯二胺；

所述反應裝置的唾液酸苷酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙 酰神經氨酸鹽，其對應的顯色劑A為固紫B或固紅TR；

所述反應裝置的白細胞酯酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸 鹽；

所述反應裝置的β-葡萄糖醛酸酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚 -β-葡萄糖醛酸鹽；

所述反應裝置的凝固酶反應孔包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其對 應的顯色劑B為固藍B、固紅B、固藍BB或固藍RR；

所述樣品稀釋液中含有Triton×100和樹膠。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述反應裝置按如 下方法制備獲得：

1)反應基板的制備：

反應基板由ABS工程塑料制成，其上有5個Φ4mm的圓孔，分別 為過氧化氫反應孔、唾液酸苷酶反應孔、白細胞酯酶反應孔、β-葡萄 糖醛酸酶反應孔和凝固酶反應孔，在每個反應孔中填入下述相應的反 應墊；

2)過氧化氫反應墊的制備：

溶液A：二乙氨基對苯二胺10mg

α-萘酚20mg

無水乙醇10ml

溶液B：辣根過氧化物酶10000單位

失活純化的牛血清白蛋白1g

Tris-HCl?200mmol/L?pH7.010ml

將溶液A?1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥1小時后，在紙墊上滴加溶液B?1μl，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

3)唾液酸苷酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神經氨酸鹽0.05g

乙酸鹽溶液200mmol/L?pH5.510ml，其中含NaCl 0.2mol/L

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流 動空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

4)白細胞酯酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸鹽0.05g

磷酸鹽緩沖液200mmol/LpH7.010ml，其中含硫酸鈉2wt％

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流 動空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

5)β-葡萄糖醛酸酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸鹽0.05g

磷酸鹽緩沖液200mmol/LpH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

6)凝固酶反應墊的制備：

底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g

Tris-HCl?200mmol/L?pH?8.510ml

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

將2)～6)制備的反應墊填入相應的反應孔中，用沖壓機壓實， 在孔上粘貼鋁箔保護膜，裝入鋁箔袋中，即得反應裝置。

3制備權利要求1或2所述試劑盒的方法，其包括如下步驟：

1)反應基板的制備：

反應基板由ABS工程塑料制成，其上有5個Φ4mm的圓孔，分別 為過氧化氫反應孔、唾液酸苷酶反應孔、白細胞酯酶反應孔、β-葡萄 糖醛酸酶反應孔和凝固酶反應孔，在每個反應孔中填入下述相應的反 應墊；

2)過氧化氫反應墊的制備：

溶液A：二乙氨基對苯二胺10mg

α-萘酚20mg

無水乙醇10ml

溶液B：辣根過氧化物酶10000單位

失活純化的牛血清白蛋白1g

Tris-HCl?200mmol/L?pH7.010ml

將溶液A?1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥1小時后，在紙墊上滴加溶液B?1μl，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

3)唾液酸苷酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神經氨酸鹽0.05g

乙酸鹽溶液200mmol/L?pH5.510ml，其中含NaCl 0.2mol/L

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流 動空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

4)白細胞酯酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸鹽0.05g

磷酸鹽緩沖液200mmol/L?pH7.010ml，其中含硫酸鈉 2wt％

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流 動空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

5)β-葡萄糖醛酸酶反應墊的制備：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸鹽0.05g

磷酸鹽緩沖液200mmol/LpH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

6)凝固酶反應墊的制備：

底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g

Tris-HCl?200mmol/L?pH?8.510ml

將底物溶液1μl滴加在Φ4mm層析紙墊上，避光條件下，25℃流動 空氣干燥4小時，密封保存在2-8℃；

7)將2)～6)制備的反應墊填入相應的反應孔中，用沖壓機壓實， 在孔上粘貼鋁箔保護膜，裝入鋁箔袋中，即得反應裝置；

8)樣品稀釋液的制備：

9)顯色劑A的制備：

充分混勻，分裝在深色瓶中；

10)顯色劑B的制備：

充分混勻，分裝在深色瓶中。