[發明專利]一種生產病毒疫苗的方法

有效

• 申請號: 200910243415.0
• 申請日: 2009-12-21
• 公開（公告）號: CN102100910A
• 公開（公告）日: 2011-06-22
• 發明（設計）人: 張韌;陳文慶;王建超;劉俊生
• 申請（專利權）人: 北京清大天一科技有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/205;A61K39/13;A61K39/29;A61K39/135;A61K39/20;A61K39/187;A61P31/12;C12N7/00;C12N5/07;C12R1/93
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

技術領域

本發明涉及一種生產病毒疫苗的方法，特別是涉及利用生物反應器和Disks載體大規模生產病毒疫苗的方法。

背景技術

通常，通過大規模培養動物細胞作為宿主細胞來生產病毒疫苗。目前，用以大規模培養動物細胞的培養體系有兩種，生物反應器和微載體，通常結合這兩種體系進行宿主細胞培養，較常使用的是攪拌式生物反應器與球形微載體的結合。雖然攪拌式生物反應器與球形微載體結合的培養工藝具有可對培養過程與質量進行監控、生產工藝穩定、易于進行規模的擴大、可減少污染發生、易于控制產品批間質量、提高細胞培養密度的優點，但是，由于這兩種體系自身的局限性，這種培養工藝存在著如下缺點：攪拌式反應器易對細胞產生剪切力從而影響細胞吸附效率最終影響細胞得率，反應器罐體的清洗、消毒費時費力，球狀微載體利用次數少，耗費生產成本等。

專利文獻1(專利號ZL?021120137)雖然提出了利用Disks作為載體進行大規模連續生產病毒疫苗的方法，但是其中使用的生物反應器為固定床籃式攪拌系統的生物反應器，與傳統的生物反應器一樣，具有剪切力大因而影響細胞得率，反應器罐體清洗、消毒費時費力因而生產成本高，容易批間污染等缺點，并且該專利認為固定床籃式攪拌系統為唯一可使用聚酯切片載體的細胞培養系統。

生物反應器和Disks載體是有別于傳統的攪拌式生物反應器和球狀微載體的新型細胞培養體系，現還沒有將這兩種培養體系結合起來用于大規模病毒疫苗生產的報道。

發明內容

鑒于現有技術中存在的上述問題，本發明的目的在于提供一種聯合使用生物反應器與Disks載體進行動物細胞大規模培養以生產病毒疫苗的方法，解決現有生物反應器微載體培養體系中存在的對細胞產生的剪切力大的問題，提高細胞得率。另外，還可以解決反應器罐體清洗消毒費時費力，生產效率低，容易產生細胞污染等問題。

為了解決上述技術問題，本發明的發明人等進行了深入研究，從而提供了以下技術方案：

1.一種生產病毒疫苗的方法，其包括以下步驟：

1)將用于生產病毒的細胞接種在裝有FibraCel?Disks載體的WAVE生物反應器中，進行細胞培養；

2)收獲病毒，制成疫苗。

2.根據技術方案1所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，在培養所述用于生產病毒的細胞的步驟1)之后，進一步包括接種并增殖待生產的病毒的步驟。

3.根據技術方案1或2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，細胞培養時的培養體積為50mL～500L，培養體積為生物反應器最大工作體積的20-80％，所述載體的用量為10g/L～40g/L。

4.根據技術方案1或2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，培養細胞時，所述生物反應器的搖動角度為3-10°，搖動頻率為6-30rpm。

5.根據技術方案1或2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，所述病毒疫苗是人用狂犬病疫苗、脊髓灰質炎疫苗、腎綜合征出血熱疫苗、乙型腦炎疫苗、甲型肝炎疫苗、獸用狂犬病疫苗、小反芻獸疫疫苗、口蹄疫病毒疫苗、豬藍耳病疫苗、豬瘟疫苗、乙型肝炎疫苗、風疹減毒活疫苗或水痘減毒活疫苗。

6.根據技術方案1或2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，所述用于生產病毒的細胞是Vero細胞、Marc145細胞、CHO細胞、PK15細胞、ST細胞、2BS細胞、KMB-17、MRC-5細胞或BHK21細胞。

7.根據技術方案6所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，所述用于生產病毒的細胞是CHO細胞或Vero細胞。

8.根據技術方案2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，所述細胞培養4-8天后，接種病毒。

9.根據技術方案2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，病毒增殖階段的培養溫度為32-35℃，pH值為7.2-7.8。

10.根據技術方案1或2所述的生產病毒疫苗的方法，其特征在于，在細胞培養中，起始培養階段即細胞粘附期的搖動頻率和搖動角度大于維持培養階段即細胞生長階段的搖動頻率和搖動角度。

11.一種細胞培養體系，其用于技術方案1或2所述的方法，該細胞培養體系包括FibraCel?Disks載體和WAVE生物反應器。

本發明具有以下的有益效果：