[發明專利]一種微載體固定化脂肪酶及其制備方法

無效

• 申請號: 200910242520.2
• 申請日: 2009-12-17
• 公開（公告）號: CN101724621A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 張增偉;顧燕松;周浩;張文波;閔瑞
• 申請（專利權）人: 北京凱泰新世紀生物技術有限公司
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種微載體固定化脂肪酶的制備方法，包括下述步驟：

1)脂肪酶復合液的制備：在脂肪酶溶液中加入所述脂肪酶溶液重量的1％～60％的載體合成用組分，混合均勻得到脂肪酶復合液；

2)將步驟1)制備的脂肪酶復合液經噴霧干燥得到微載體固定化脂肪酶；

所述載體合成用組分是預聚物分散到水中得到的溶液、分散液或乳液；所述預聚物是聚丙烯酸酯、聚氨酯或二者任意比例混合的組分；所述百分含量為重量百分含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚丙烯酸酯是以丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸甲酯、丙烯酸異辛酯、丙烯酸乙烯酯、甲基丙烯酸甲酯、醋酸乙烯和丙烯酸中兩種或三種以上任意組合為單體進行聚合反應得到的共聚物；所述聚氨酯是多異氰酸酯與低聚多元醇的嵌段共聚物；所述低聚多元醇優選為聚醚二醇或聚酯二醇，所述多異氰酸酯為芳香族異氰酸酯或脂肪族二異氰酸酯；所述芳香族異氰酸酯優選為甲苯二異氰酸酯或二苯甲烷二異氰酸酯，所述脂肪族二異氰酸酯優選為六次亞甲基二異氰酸酯。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述脂肪酶復合液的脂肪酶活力范圍為0～50000U/g溶液但不包括0U/g溶液；優選為3000～20000U/g溶液；特別優選為3000～18000U/g溶液。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中還包括將所述脂肪酶溶液中加入質量百分濃度為1～10‰的通用酶穩定劑，所述通用酶穩定劑為PEG、明膠和海藻糖中的一種或兩種以上任意混合；所述載體合成用組分的添加量為所述脂肪酶溶液重量的6％～60％，優選為12％-60％，特別優選為20％-60％；所述百分含量為重量百分含量。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于：所述載體合成用組分的含固量為2％～66％，優選含固量為25％～50％。

6.根據權利要求1-5中任意一項所述的方法，其特征在于：所述聚丙烯酸酯優選為下述1)-6)中任意一項所述的共聚物：

1)丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯按質量分數比為(1～3)∶(1～4)∶(2～6)的比例聚合反應得到的共聚物；

2)丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯按質量分數比為1.1∶1.3∶2的比例聚合反應得到的共聚物；

3)丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸和丙烯酸異辛酯按質量分數比為6∶4∶3∶2的比例聚合反應得到的共聚物；

4)丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯按質量分數比為1∶1∶2的比例聚合反應得到的共聚物；

5)丙烯酸乙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸乙烯酯和甲基丙烯酸甲酯按質量分數比為3∶2∶1∶2的比例聚合反應得到的共聚物；

6)丙烯酸丁酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸甲酯和醋酸乙烯按質量分數比為2∶1∶3∶6的比例聚合反應得到的共聚物；

所述聚氨酯優選為下述1)-4)中任意一項所述的共聚物：

1)甲苯二異氰酸酯與聚醚二醇按照物質的量比為3∶2的比例聚合得到的共聚物；

2)甲苯二異氰酸酯與聚酯二醇按照物質的量比為3∶1的比例聚合得到的共聚物；

3)六次亞甲基二異氰酸酯與聚酯二醇按照物質的量比為2∶1的比例聚合得到的共聚物；

4)二苯甲烷二異氰酸酯與聚酯二醇按照物質的量比為9∶2的比例聚合得到的共聚物。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的方法，其特征在于：當所述預聚物是聚丙烯酸酯和聚氨酯混合的組分時，所述聚丙烯酸酯和聚氨酯的質量比優選為(1-4)∶(1-2)；更優選為1∶1、3∶2或者4∶1；所述低聚多元醇的重均分子質量為0.4～3.1kDa；所述脂肪酶溶液為脂肪酶發酵液或脂肪酶純粉水溶液。

8.根據權利要求1-7中任意一項所述的方法，其特征在于：所述噴霧干燥時干燥風在干燥室入口處的溫度為100～360℃，優選為126～220℃，最優選為126-210℃；干燥室出口溫度為10～98℃，優選為60-90℃；所述方法中，整個噴霧過程時間為60秒以下，優選為10-55秒。