[發明專利]檢測三聚氰胺的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 200910242090.4
• 申請日: 2009-12-04
• 公開（公告）號: CN102086230A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發明（設計）人: 吳小平;江海洋;王戰輝;史為民;徐飛;李娜;王熙;米鐵軍;王進
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/04;G01N33/08;G01N33/10;G01N33/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC?No.3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細胞株MAL分泌產生的。

2.保藏編號為CGMCC?No.3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細胞株MAL。

3.權利要求1中所述單克隆抗體在制備檢測三聚氰胺的酶聯免疫試劑盒中的應用。

4.一種酶聯免疫試劑盒，為下述1)、2)、3)或4)中任一所述酶聯免疫試劑盒：

1)酶聯免疫試劑盒中三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯物、權利要求1中所述展青霉素單克隆抗體和酶標記抗抗體；其中，所述偶聯物作為包被原；

2)酶聯免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標記物、權利要求1中所述展青霉素單克隆抗體和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；

3)酶聯免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標記物、權利要求1中所述展青霉素單克隆抗體；其中，所述展青霉素單克隆抗體作為包被原；

4)酶聯免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯物、權利要求1中所述展青霉素單克隆抗體的酶標記物；其中，所述偶聯物作為包被原；

所述三聚氰胺半抗原的結構式如式I所示：

5.根據權利要求4所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶聯免疫試劑盒包括三聚氰胺標準品溶液、底物顯色液、洗滌液、樣品稀釋液；

所述三聚氰胺標準品溶液為濃度分別為0μg/L、5μg/L、20μg/L、100μg/L、500μg/L和2500μg/L的三聚氰胺標準品溶液；

所述底物顯色液由A液和B液組成，A液為濃度為1.5％-2.5％的過氧化脲的水溶液，B液為濃度為0.5％-1.5％的四甲基聯苯胺的水溶液；

所述洗滌液為濃度為0.8％～1.2％的吐溫20和濃度為0.3％-0.7％的疊氮化鈉的0.005M-0.015M磷酸鹽緩沖液；

所述樣品稀釋液為20×(0.03mol/L-0.05mol/L)的磷酸鹽緩沖液。

6.根據權利要求4或5所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體。

7.根據權利要求4-6中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、兔血清蛋白、血藍蛋白或卵清白蛋白。

8.一種檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括如下步驟：

1)將待測樣品進行前處理，得到待測樣本溶液；

2)用權利要求4-7中任一所述試劑盒對所述待測樣本溶液進行檢測；

所述前處理的方法為下述a)、b)、c)、d)、e)和f)中的任一：

a)所述待測樣品為奶粉；每取0.8g-1.2g所述奶粉溶于8ml-12ml權利要求5中所述樣品稀釋液中，混合均勻，離心，取上清液，即為待測樣本溶液；

b)所述待測樣品為牛奶；將所述牛奶與權利要求5中所述樣品稀釋液按照1∶(9-11)的體積比混勻，得到的溶液即為待測樣本溶液；

c)所述待測樣品為蛋；將每0.8g-1.2g蛋用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提取液即為待測樣本溶液；

d)所述待測樣品為寵物食品；將每1.8g-2.2g寵物食品用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提取液即為待測樣本溶液；

e)所述待測樣品為飼料；將每0.8g-1.2g飼料用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提取液即為待測樣本溶液；

f)所述待測樣品為小麥面筋；將每0.1g-0.3g小麥面筋用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提取液即為待測樣本溶液；

所述提取劑的組成為：由Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、NaCl、Tween20和水組成，所述Na₂HPO₄·12H₂O在所述提取劑中的濃度為2.9g/L，所述NaH₂PO₄·2H₂O在所述提取劑中的濃度為0.2g/L，所述NaCl在所述提取劑中的濃度為0.9g/L，所述Tween20在所述提取劑中的濃度為0.05g/L。