[發明專利]水稻黑條矮縮病毒冰凍毒源的活化方法

無效

• 申請號: 200910241900.4
• 申請日: 2009-12-16
• 公開（公告）號: CN101775373A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 李莉;王錫鋒;董海波;李紅偉;周廣和;劉艷;吳蓓蕾
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 胡敬紅

技術領域

本發明屬于生物學領域，特別是涉及一種水稻病毒冰凍毒源的活化方法。?

背景技術

水稻黑條矮縮病毒(Rice?black?streaked?dwarf?virus，RBSDV)可侵染水稻、玉米和小麥，引起水稻黑條矮縮病和玉米粗縮病。自1996年以來，在江蘇、浙江、福建、江西等稻區，水稻黑條矮縮病在沉寂多年后再度爆發流行，流行地區約60％的稻田發病，一般田塊株發病率10～30％，嚴重田塊可高達40～80％以上。2004年，在浙江省中南部雜交稻種植區發病面積80萬畝，僅臺州市發病面積就達48萬畝，占水稻播種面積的33％，損失產量2萬余噸。2006～2007年在江蘇桐城、鹽城、泰州等地區的華粳6號、淮稻5號、II優084等水稻品種上，病株率一般在20-30％，嚴重的在80％左右，有的重病田病株率甚至高達90％以上。2007年僅江蘇省發病面積就達30.8萬畝，2008年更猛增至390.7萬畝，今年有報道湖南61個縣市區發現水稻黑條矮縮病，該病已成為威脅我國水稻生產的重要病毒病。?

玉米粗縮病則是一種世界性的玉米病毒病害，自1954年在我國新疆南部和甘肅西部首次發現以來，曾于上世紀90年代在我國玉米主產區嚴重流行，據不完全統計，1996年全國發病面積250萬公頃；1997年全國發病面積也達233萬公頃以上；一般田塊產量損失40％～50％，發病較重的田塊產量損失在80％以上，嚴重田塊幾乎毀種絕收。在沉寂幾年之后，近年又再度在我國山東、河南、河北、江蘇等地大爆發，并呈現逐年上升趨勢，2005年在山東省發生247萬畝，2006年297萬畝，2007年340萬畝，2008年高達1200萬畝，部分田塊毀種。2008年江蘇省發病面積也達到了到236.89萬畝，目前玉米粗縮病已成為玉米生產上最為嚴重的病毒病害。?

在自然情況下，這兩種病害均由灰飛虱(Laodelphax?striatellus?Fallen)以持久性方式特異性的傳播，病毒不經卵傳遞給下一代。帶毒灰飛虱刺吸寄主植物時經口針傳播病毒，一般雌蟲傳毒效率較雄蟲高。除灰飛虱外，白脊飛虱(Unkanodes?sapporona)、白帶飛虱(U.albifascia)也可以傳播RBSDV。由于灰飛虱傳毒的瞬時性和持久性，病毒病防治藥劑缺乏，防蟲治病非常困難，農藥的使用也存在許多弊病，因此最為經濟有效的途徑是利用品種自身的抗性達到主動防治病毒病害目的。灰飛虱傳毒是品種抗病性評價、病毒致病性、病毒傳播機制等研究的基礎，由于RBSDV不能通過人工摩擦、土壤、種子等傳播，僅依靠昆蟲介體傳播，使得植株的抗病性鑒定、致病性和傳毒機制等研究難度很大。另外把病毒保存在活的水稻植株上，但傳代過程中，病毒(RNA病毒)分離物發生變異的幾率很高，對于大量分離物的保存也要耗費大量的人力財力。因此可靠的人工接種技術對保證RBSDV病原、抗病性鑒定、介體傳毒機制等工作的連續性、重復性及準確性顯得尤為重要。

發明內容

基于上述研究領域中的空白，本發明提供了水稻黑條矮縮病毒冰凍毒源的活化方法，為植物抗病性鑒定、致病力、傳毒機制研究等提供接種手段。?

水稻黑條矮縮病毒冰凍毒源的活化方法，包括如下步驟：1)采集被水稻黑條矮縮病毒(RBSDV)侵染的植株新鮮葉片，于-20～-70℃冰凍保存，2)將冰凍過的葉片充分吸水，喂飼傳播水稻黑條矮縮病毒的介體昆蟲，3)將喂飼過的介體昆蟲飼養在其喜食的寄主植株上，以便渡過循回期，4)用渡過循回期的介體昆蟲接種到易感染水稻黑條矮縮病毒的健康植株上，使健康植株被水稻黑條矮縮病毒侵染。?

所述步驟1的冰凍溫度為-70℃。?

所述植株為水稻、玉米或小麥。?

所述介體昆蟲為灰飛虱(Laodelphax?striatellus?Fallen)、白脊飛虱(Unkanodes?sapporona)或白帶飛虱(U.albifascia)。?

所述植株為水稻或玉米，所述介體昆蟲為灰飛虱(Laodelphax?striatellus?Fallen)。?

所述步驟2的介體昆蟲在喂飼前于黑暗饑餓3-5小時。?

所述步驟2的介體昆蟲被喂飼48小時。?

所述健康植株為1.5-2葉期的健康植株。?