[發明專利]MG53蛋白預防和/或治療心臟缺血/再灌損傷的用途

有效

• 申請號: 200910241451.3
• 申請日: 2009-12-02
• 公開（公告）號: CN101797375A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發明（設計）人: 曹春梅;張巖;肖瑞平;麻建杰
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61P9/10;A61P9/00;A61P9/04;A61P9/06
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 何文彬

技術領域

本發明涉及MG53蛋白的新用途，尤其是在制備用于預防和/或治療心臟缺血/再灌損傷所致疾病的藥物中的用途。?

背景技術

缺血性心肌病是目前造成人類死亡的最主要的原因之一¹。冠狀動脈粥樣硬化或者血栓造成的血管堵塞，以及冠狀動脈手術都會造成心肌細胞的缺血死亡，而目前防止心肌細胞的缺血死亡的最佳辦法就是恢復血流。但是在血流恢復后的一小段時間內，由于大量富含氧和其他營養物質的血流進入到缺血區，會引起缺血區心肌細胞內的氧化應激反應、鈣離子超載以及有害組分的激活，這些都會進一步加重心肌細胞的損傷，引起更多的心肌細胞的死亡，這就是心臟缺血/再灌注損傷。缺血/再灌損傷最常見的后果是引起“心力衰竭”。同時心肌細胞的死亡還可以引起“心律失常”，“心臟破裂”等并發癥。?

缺血預適應是目前發現的對抗缺血損傷以及再灌注引起的損傷最強有效的心臟保護機制?²。缺血預適應是指在長時間的缺血以前，進行幾個短暫的心臟缺血和再灌注的循環，能夠保護心臟免受后面的長時間缺血和再灌注引起的損傷。除心臟以外，腦、肝臟、腎臟等其他器官中都有缺血預適應現象^3-5。?

目前已發現有很多的細胞信號分子都參與心臟缺血預適應過程，包括促進細胞生存的激酶(PI3K，Akt以及GSK3β)^6-8以及細胞內的“腳手架”蛋白，Caveolin?3(CaV3)⁹。這些分子的缺失都能夠影響缺血預適應的保護作用，而它們的蛋白水平或者活性的增加都能夠產生類似于心臟缺血預適應的保護作用。尤其是其是CaV3這種“腳手架”蛋白能夠在細胞內聚集生存相關的分子，從而促進其相互的活化。但是以上提到的這些分子都是相對獨立的信號體系，它們之間的聯系和相互作用，以及調節這些信號分子在細胞內的空間和時間分布的因素，目前還沒有研究清楚，但這些因素對于人們了解缺血預適應現象的機制，從而將其應用到臨床卻具有非常重要的意義。?

MG53是最近發現的一種在心肌和骨骼肌中特異性表達的蛋白，其氨基酸序列如MG53蛋白氨基酸序列表中的SEQ?ID?NO.1所示。MG53蛋白的制備方法如下：先從心臟組織提取mRNA，?通過逆轉錄合成cDNA文庫，然后用MG53基因的特異引物進行PCR擴增，將擴增得到的特異條帶連接入測序載體，測序證實其序列的正確性。利用PCR擴增時引物兩端引入的酶切位點將擴增獲得的特異條帶構建到真核表達載體pcDNA4/TO/MYC?HisB中，用該載體轉染HEK?293A細胞，利用載體上的抗性基因Zeocin篩選出穩定表達MG53蛋白的細胞。培養該細胞系大量擴增表達蛋白，破碎細胞之后，收集總蛋白，利用MG53的多抗親和純化MG53蛋白，蛋白純度通過PAGE檢測。?

已有的研究結果表明，在骨骼肌中MG53能夠作為一種結構蛋白促進細胞膜損傷的修復¹⁰，同時也能夠調節細胞內小泡的轉運和骨骼肌細胞再生^11，12。目前，有關MG53的研究都是在骨骼肌內進行的，包括細胞小泡的轉運，肌細胞的再生以及膜修復等。但是MG53是一種在骨骼肌和心肌內特異性表達的蛋白，而且在心肌內的表達量大于骨骼肌¹⁰，因此MG53蛋白很可能在心臟缺血預適應保護作用中扮演著重要的角色。鑒于心血管系統和人類的生命密切相關，心血管系統疾病又是危害人類健康，威脅人類生命的最主要的原因之一，因此，研究MG53蛋白在心臟缺血預適應保護作用中所起的作用，對于充分開發其在缺血性心肌病方面的臨床應用具有更加重要的意義。?

發明內容

本發明的目的是公開MG53蛋白的新功能，提供MG53蛋白的一種新的用途，具體是在制備用于預防和/或治療心臟缺血/再灌損傷所致疾病的藥物中的用途。缺血/再灌損傷最常見的后果是引起“心力衰竭”。缺血/再灌損傷會引起心肌細胞的死亡，心肌細胞的死亡還可以引起“心律失常”，“心臟破裂”等并發癥。因此預防和/或治療心臟缺血/再灌損傷，也能預防和/或治療心力衰竭、心律失常、心臟破裂。?

本發明人經過努力的研究證明了：MG53蛋白能夠對心臟缺血/再灌損傷產生保護作用；MG53產生上述保護作用的機制是將兩條重要的IPC(缺血預適應)分子通路，即PI3K-Akt-GSK3β通路和CaV3通路，聯系起來，它通過促進CaV3和PI3K-p85的相互作用，進而活化Akt/GSK3β通路，產生其保護作用，說明MG53蛋白是這兩條通路相互作用必需的中間分子。?