[發(fā)明專利]一種葡萄糖代謝脫阻遏、高產(chǎn)蝦青素的法夫酵母突變株MK19及其培養(yǎng)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910241353.X | 申請(qǐng)日： | 2009-12-07 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101717731A | 公開(kāi)（公告）日： | 2010-06-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李穎;苗莉莉;遲爽;關(guān)國(guó)華;王珍芳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/16 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/16;C12N15/01;C12P23/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京君智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11305 | 代理人： | 向華 |
| 地址： | 100094 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 葡萄糖 代謝 阻遏 高產(chǎn) 蝦青素 酵母 突變 mk19 及其 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種葡萄糖代謝脫阻遏、高產(chǎn)蝦青素的法夫酵母(Phaffia rhodozyma)突變株MK19，其保藏編號(hào)為CGMCC?No.3445。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄糖代謝脫阻遏、高產(chǎn)蝦青素的法夫酵 母突變株MK19的培養(yǎng)方法，其特征在于該方法的步驟如下：
A、PDA固體斜面培養(yǎng)基配制如下：200g馬鈴薯經(jīng)洗凈去皮切碎后， 加水1000ml煮沸半個(gè)小時(shí)，用紗布過(guò)濾，其濾液再加20g葡萄糖，混勻 后用去離子水補(bǔ)充液體體積至1000ml，在溫度115℃下滅菌15分鐘，得 到PDA液體培養(yǎng)基，往該P(yáng)DA液體培養(yǎng)基中加入15g瓊脂，待瓊脂溶解、 凝固后得到PDA固體培養(yǎng)基；
B、配制液體種子培養(yǎng)基：將36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g 尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾水，定溶 至1000ml，調(diào)節(jié)pH至5.8-6.2；
C、配制液體低糖發(fā)酵培養(yǎng)基：將36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、 0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾 水，定溶至1000ml，調(diào)節(jié)pH至5.8-6.2；
D、配制液體高糖發(fā)酵培養(yǎng)基：將100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、 0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾 水，定溶至1000ml，調(diào)節(jié)pH至5.8-6.2；
E、培養(yǎng)條件與方法
(1)固體種子活化：將含有篩選突變株MK19的菌液涂布在步驟(A) 制備的PDA固體培養(yǎng)基平板上，在溫度21-25℃下進(jìn)行斜面培養(yǎng)3-7天， 然后置于溫度3-5℃下保存；
從PDA斜面挑取菌苔接種至新鮮PDA斜面上，再在溫度24-26℃培 養(yǎng)3～7天，得到活化突變株MK19固體種子；
(2)液體種子活化：從上述(1)得到的活化突變株MK19固體種子挑 取兩環(huán)菌苔轉(zhuǎn)移到在步驟(B)制備的液體種子培養(yǎng)基中，在溫度24-26℃及 搖床振蕩速度180-220rpm下培養(yǎng)3天；得到的液體種子再以所述的液體 種子培養(yǎng)基體積計(jì)按照8-10％接種量加到所述的液體培養(yǎng)基中，在溫度 24-26℃與振蕩速度180-220rpm下培養(yǎng)35-40小時(shí)；采用紫外分光光度法 測(cè)定該培養(yǎng)液的OD值為9-12；
(3)發(fā)酵培養(yǎng)：上述(2)得到的活化液體種子以所述的低糖或高糖發(fā) 酵培養(yǎng)基體積計(jì)按照5-7％接種量接種至所述的低糖或高糖發(fā)酵培養(yǎng)基 中，在溫度24-26℃與振蕩速度200-240rpm下培養(yǎng)4-5天，得到所述突變 株MK19的發(fā)酵液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于將40g葡萄糖、4.0g酵 母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水中， 并定容至1000ml，制備得到所述的液體種子培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于將40g葡萄糖、4.0g酵 母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水，并 定容至1000ml中，制備得到所述的液體低糖發(fā)酵培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于將100g葡萄糖、4.0g酵 母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水中， 并定容至1000ml，制備得到所述的液體高糖發(fā)酵培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于所述 突變株MK19發(fā)酵液的蝦青素含量是20-30mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的蝦青素含量是采 用高壓液相色譜法檢測(cè)的。
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