[發(fā)明專利]肝組織特異性表達(dá)rtTA的載體及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910237411.1
• 申請日: 2009-11-06
• 公開（公告）號: CN101717787A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫世惠;周育森;周小軍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種肝組織特異性表達(dá)rtTA的載體及其應(yīng)用，特別涉及該載體及其在創(chuàng)建肝組織特異性表達(dá)rtTA小鼠模型中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝組織特異性表達(dá)的rtTA，能被強(qiáng)力霉素(Dox)所誘導(dǎo)和激活，并與Tet反應(yīng)性元件(TRE)的操縱基因序列TetO結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性，實現(xiàn)外源基因肝組織特異性表達(dá)，以肝組織特異性表達(dá)rtTA的載體制備的轉(zhuǎn)基因小鼠，可與TRE效應(yīng)載體轉(zhuǎn)基因小鼠雜交獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠，通過強(qiáng)力霉素(Dox)誘導(dǎo)實現(xiàn)目的基因在小鼠肝臟特異性表達(dá)，可用于特定基因在個體發(fā)育中的功能及基因治療研究、肝炎病毒基因表達(dá)及致病機(jī)制研究、uPA人鼠嵌合肝模型及肝炎病毒感染研究等。

基因的組織特異性表達(dá)在生物體的個體發(fā)育過程中起重要作用，此過程受組織特異性啟動子控制。組織特異性啟動子在外源基因的組織細(xì)胞特異性表達(dá)、基因治療等方面有重要的應(yīng)用前景。組織特異性表達(dá)可降低機(jī)體免疫反應(yīng)，并且避免對其他器官的副作用。目前已發(fā)現(xiàn)許多肝細(xì)胞特異性啟動子，如甲胎蛋白(AFP)啟動子、白蛋白(Albumin)啟動子、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)啟動子等，已被用于目的基因在肝組織特異性表達(dá)，如He等將白細(xì)胞介素-2(IL-2)構(gòu)建在AFP增強(qiáng)子及白蛋白啟動子驅(qū)動下，使得IL-2只在肝癌細(xì)胞系中表達(dá)(He?P，Tang?ZY，Yc?SL，et?al.The?targetedexpression?of?interleukin-2?in?human?hepatocellular?carcinoma?cells.J?Exp?Clin?CancerRes，2000，19(2)：183-187)。增強(qiáng)子等反應(yīng)元件對這些啟動子的轉(zhuǎn)錄活性也有影響，如Kramer等將白蛋白、α1-AT、植物血凝素蛋白、乙肝病毒增強(qiáng)子II等各種肝特異性啟動子和增強(qiáng)子隨機(jī)串聯(lián)組合，篩選出了能在肝細(xì)胞中長期穩(wěn)定高水平表達(dá)的最佳組合(Kramer?MG，Barajas?M，Razquin?N，et?al.In?vitro?and?in?vivo?comparative?studyof?chimeric?liver-specific?promoters.Mol?Ther，2003，7(3)：375-385)。

血清白蛋白是由哺乳動物肝臟細(xì)胞合成的具有重要生理功能的蛋白質(zhì)，其合成受到肝臟的生長發(fā)育調(diào)控，在發(fā)育過程中合成量逐漸升高，血清白蛋白只能由分化成熟的肝臟細(xì)胞合成，其他組織細(xì)胞中的白蛋白基因處于關(guān)閉狀態(tài)(Vorachet?WR，Steppan?CM，Lima?M，et?al.Distant?enhancers?stimulate?the?albumin?promoter?throughcomplex?proximal?binding?sites[J].J?Biological?Chemistry，2000，275(37)：29-31)。白蛋白基因主要在轉(zhuǎn)錄水平上受到白蛋白啟動子(Albumin?promoter)調(diào)控，白蛋白啟動子的克隆及真核表達(dá)載體構(gòu)建對于外源基因的肝組織特異性表達(dá)具有重要意義。利用血清白蛋白啟動子進(jìn)行外源基因的表達(dá)具有較好的肝組織特異性，并且由于血清白蛋白在體內(nèi)含量高，啟動子在體內(nèi)較高的轉(zhuǎn)錄活性。由于白蛋白的表達(dá)水平與白蛋白啟動子活性密切相關(guān)，而肝癌細(xì)胞系中白蛋白的表達(dá)水平僅為肝臟細(xì)胞的5％～10％，因此白蛋白啟動子在肝癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性與體內(nèi)肝臟細(xì)胞中的活性并不完全相同，在體內(nèi)該啟動子的轉(zhuǎn)錄活性可能遠(yuǎn)高于肝癌細(xì)胞系中的活性(Clayton?DF，Weiss?M，Darnell?JE.Liver-specific?RNA?metabolism?in?hepatoma?cells：variations?in?transcription?rates?and?mRNA?levels[J].Molecular?Cellular?Biology，1985，5：2633；Zaret?KS，DiPersio?CM，Jackson?SA，et?al.Conditional?enhancement?of?liver-specific?genetranscription[J].Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1988，85：9076)。利用該啟動子建立肝組織特異性可調(diào)控表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動物模型是可行的。