[發明專利]一種制備修飾有抗體的微懸臂梁的方法

無效

• 申請號: 200910236140.8
• 申請日: 2009-10-20
• 公開（公告）號: CN101694494A
• 公開（公告）日: 2010-04-14
• 發明（設計）人: 王保民;南鐵貴;趙洪偉;譚桂玉;劉威;高巍;譚偉明;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N21/31;B81C99/00;B81B7/02;C07K17/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種制備修飾有抗體的微懸臂梁的方法。

背景技術

微懸臂梁傳感技術是在微電子機械系統(MEMS)技術和原子力顯微鏡(AFM) 發展的基礎上迅速發展起來的一種新型傳感技術，是納米傳感技術研究的新熱點。 研究發現，當微懸臂梁單側表面上有生化反應發生時，其表面應力的改變將會導致 微懸臂梁產生彎曲變形或者振動特性改變，結合光學或電學方法進行讀出。基于依 靠免疫特異性識別建立的微懸臂梁免疫傳感技術，結合酶聯免疫檢測技術(ELISA) 的優點，使檢測技術得到了較大的提升。該項技術可以不需要標記物，靈敏度高， 并且容易實現大尺度、高通量、平行陣列測量的顯著優勢。近年來，這項新興技術 在對癌癥檢測、DNA雜交和轉錄因子等方面都得到了廣泛的應用，但是在食品與環 境安全領域監測的研究并不多見。

微懸臂梁免疫傳感技術的廣泛應用的前提是如何將靈敏度高、特異性強的抗體 有效結合到微懸臂梁的金膜上，同時盡量降低該抗體活性的損失。目前，國內外文 獻報道的方法主要通過具有雙功能基團的巰基化試劑進行，通過在抗體上引入巰基 以實現抗體和金膜的結合，從而達到檢測的目的(中國專利CN101407548)，但這 種直接巰基化抗體的方法，需要對每種抗體都進行巰基化后才能檢測，使用麻煩， 另外直接巰基化抗體容易引起抗體活性的損失，因而限制了微懸臂梁免疫傳感技術 的廣泛應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備修飾有抗體的微懸臂梁的方法。

本發明所提供的制備修飾有抗體的微懸臂梁的方法，由如下步驟組成：

1)通過巰基化將抗抗體連接到帶有金膜的微懸臂梁上，得到修飾有抗抗體的 微懸臂梁；

2)通過抗體與抗抗體的相互結合作用，將抗體連接到所述修飾有抗抗體的微 懸臂梁上，得到修飾有抗體的微懸臂梁。

上述方法中，所述抗抗體可為鼠源抗抗體；所述抗體可為鼠源抗體。

上述方法中，所述鼠源抗抗體可為羊抗鼠抗抗體；所述鼠源抗體可為鼠源單克 隆抗體或鼠源多克隆抗體。

上述方法中，所述鼠源單克隆抗體具體可為抗脫落酸單克隆抗體或抗玉米素核 苷單克隆抗體。

上述方法中，所述通過抗體與抗抗體的相互結合作用，將抗體連接到所述修飾 有抗抗體的微懸臂梁上的方法為將所述修飾有抗抗體的微懸臂梁置于所述抗體的 溶液中，在30℃-37.5℃的條件下反應0.5h-2.0h；優選為在30℃-37℃的條件 下反應1h-2.0h。

上述方法中，所述抗體的溶液中所述抗體的濃度為1ug/ml-3ug/ml。

上述方法中，所述通過巰基化將抗抗體連接到帶有金膜的微懸臂梁上，得到修 飾有抗抗體的微懸臂梁的方法為：將所述抗抗體利用巰基化試劑進行巰基化，得到 巰基化抗抗體，將所述帶有金膜的微懸臂梁投入到巰基化抗抗體溶液中，反應，得 到修飾有抗抗體的微懸臂梁。

所述巰基化試劑包括鹽酸硫醇亞胺、11-羧酸硫醇(11-MUA)、2-氨基乙硫醇 (AET)、3-巰基丙酸(MPA)、磺基羥基琥珀酰亞胺基-6-(3′，2-吡啶二硫-丙酰胺) -己酸酯(Sulfo-LC-SPDP)和3，3′-二硫雙磺基琥珀酰亞胺丙酸酯(DTSSP)等。

上述方法中，所述將所述帶有金膜的微懸臂梁投入到巰基化抗抗體溶液中反應 中，所述反應的條件為：溫度為30-37.5℃，時間為0.5-2.0h；所述溫度優選為 37℃，所述時間優選為1h。

由上述任一所述方法制備得到的修飾有抗體的微懸臂梁也屬于本發明的保護 范圍。

鑒于微懸臂梁免疫傳感技術對抗體固定的重要性及巰基化試劑參與抗體固定 的復雜性，本發明先將抗抗體修飾到微懸臂梁上，然后通過抗抗體與抗體的特異性 識別反應相結合，將抗體固定到微懸臂梁的金膜上。結果表明，本發明所制備的修 飾有抗體的微懸臂梁的方法與現有的方法相比具有反應步驟少、操作時間短、避免 因巰基化反應對抗體活性的損失、使抗體定向結合從而暴露更多的抗原作用位點的 優點。因此，本發明的方法及產品在微懸臂梁免疫傳感技術領域具有廣闊的應用前 景。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

實施例1、制備修飾有羊抗鼠抗抗體的微懸臂梁