[發明專利]直接抗人球蛋白試劑卡的制備方法

有效

• 申請號: 200910234612.6
• 申請日: 2009-11-25
• 公開（公告）號: CN101718785A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 陳玉平;錢國強;朱慶平
• 申請（專利權）人: 江陰力博醫藥生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/68;G01N33/80
• 代理公司: 江陰市同盛專利事務所 32210
• 代理人: 唐紉蘭

(一)技術領域

本發明涉及一種用于檢測致敏紅細胞的不完全抗體和(或)補體的微 柱凝膠卡及其應用。更具體的說，本發明涉及一種直接抗人球蛋白試劑卡 的組成、制備方法及其應用，涉及血液檢驗等醫學領域。

(二)背景技術

抗人球蛋白試驗誕生于1945年。一些患者的血液中含有抗患者紅細 胞的凝集素，但將這些血清與紅細胞后混合后并未出現凝集反應，而當加 入血清抗體后，即抗人球蛋白試劑(抗IgG)、抗C₃d試劑，便出現凝集反 應。該試驗即稱為抗人球蛋白試驗。最初只用于檢測血清中的抗體，之后 同樣的原理用于檢測體內包被紅細胞的抗體和補體。目前，直接抗人球蛋 白試驗在臨床上主要應用于：胎母血型不合新生兒溶血病、免疫溶血性輸 血反應、自身免疫性溶血性貧血、藥物導致的免疫性溶血性貧血等。

抗人球蛋白試驗是理論上最明確、最準確的方法，但是由于其繁瑣的 操作，且不能同時對多份樣品進行檢測，所以只能將該方法用于對少數標 本的確定。長期以來，在我國臨床常規檢測中只能首先進行鹽水血凝試驗， 然后用加入促進血凝試劑的篩檢試驗，最后才是對少數標本進行抗人球蛋 白試驗。

而直接抗人球蛋白試劑卡省略了傳統的試管液體介質的繁瑣洗滌程 序，也省去了必須在陰性結果試管中加入不完全抗體致敏的紅細胞，以確 認陰性結果是否正確的步驟。使得試驗如同鹽水血凝試驗一樣簡單、方便， 且敏感性高，具有結果更易判斷并能較長時間保存，標本用量少，又能同 時檢測多份標本等優點。

在國內外，尚無廠家生產直接抗人球蛋白試劑卡，只有部分廠家生產 了類似產品，其只能檢測到有抗體致敏了紅細胞，但不能確定這種抗體是 IgG類還是C₃d類。而且其采用的凝膠為葡聚糖凝膠，此凝膠的顆粒大小 為70納米以上，顆粒較大，凝膠之間的縫隙較大，從而使得試驗的靈敏度 降低。

(三)發明內容

本發明的目的在于克服上述不足，提供一種靈敏度高、特異性好、質 量穩定且一張卡可以同時檢測IgG類抗體致敏的紅細胞和C₃d補體致敏的 紅細胞，并能準確判斷是IgG類抗體還是補體致敏的紅細胞的直接抗人球 蛋白試劑卡的制備方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種直接抗人球蛋白試劑卡的制備方法， 所述試劑卡上具有6個微柱凝膠管，2人份/試劑卡，分別是二管含有抗IgG (抗人球蛋白)的凝膠管、二管含有抗C₃d的凝膠管和二管含有凝膠懸浮 介質的凝膠管。所述方法包括以下工藝過程：

步驟一、凝膠懸浮介質的配制

所述凝膠懸浮介質配方如下：

對羥基苯甲酸甲酯????(5.5-6.5)×10^-4g/ml

對羥基苯甲酸丙酯????(1.0-1.5)×10^-4g/ml

甘氨酸??????????????(1.6-1.9)×10^-2g/ml

氯化鈉??????????????(1.7-1.8)×10^-3g/ml

磷酸二氫鉀??????????(2.1-2.4)×10^-4g/ml

磷酸氫二鈉??????????(4.6-4.8)×10^-4g/ml

牛血清白蛋白????????≤2％，

以上試劑用蒸餾水溶解，調pH值為6.6-6.8。

步驟二、凝膠的制備

選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米。用步驟一配制 的凝膠懸浮介質浸泡后再用該凝膠懸浮介質洗滌3-5次，除去凝膠破損碎 片以及聚集的凝膠顆粒，收集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的適用 的凝膠。

步驟三、抗體的選擇

抗IgG試劑(抗人球蛋白)的選擇：要求按照體積比1∶2和體積比1∶ 4稀釋的抗人球蛋白試劑(抗IgG)必須對按照體積比1∶16稀釋的抗D?IgG 致敏的紅細胞有肉眼可見凝集。

抗C₃d試劑的選擇：要求按照體積比1∶2和體積比1∶4稀釋的抗C₃d 試劑必須對C₃d致敏的紅細胞有肉眼可見凝集，與抗C₃d試劑原液的反應 強度≥1+。

步驟四、凝膠的配制