[發(fā)明專利]一株屎腸球菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910232712.5
• 申請(qǐng)日: 2009-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN101701202A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐幸蓮;盧士玲;周光宏;劉登勇;韓衍青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P13/00;C12R1/01
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株微生物及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

酪胺的化學(xué)名稱為對(duì)羥基-β苯乙胺，是合成藥物的重要中間體，可 以作為生化試劑，目前，我國(guó)酪胺及其衍生物的需求量大，但國(guó)內(nèi)尚無企 業(yè)能生產(chǎn)出合格產(chǎn)品，從國(guó)外進(jìn)口價(jià)格很高。

傳統(tǒng)的酪胺生產(chǎn)是采用化學(xué)合成方法，對(duì)環(huán)境污染大，生產(chǎn)效率低， 難以提純。以酪氨酸為前體，利用微生物產(chǎn)生的酪氨酸脫羧酶，通過微生 物代謝生產(chǎn)酪胺，獲得高濃度酪胺液，然后分離酪胺，可降低酪胺的生產(chǎn) 成本和能源消耗，也成為研究的主要課題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：針對(duì)目前酪胺生產(chǎn)存在的問題，提供一種微生物 并通過該微生物代謝產(chǎn)生酪胺，獲得高濃度酪胺液。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一株屎腸球菌(Enterococcus?faecium)， 其特征在于：保藏號(hào)為CGMCC?No.3165，菌落在MRS瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24h，在MRS液體培養(yǎng)基中富集，乳白色菌落，橢圓形，成短鏈， 革蘭氏陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，該菌株在普通顯微鏡下呈橢圓形，其16S rDNA的Genbank登陸號(hào)為GQ890354。

在本發(fā)明中：所述的MRS瓊脂培養(yǎng)基為：所述的MRS液體培養(yǎng)基為： 蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，檸檬酸氫三銨2g，葡萄糖20g，吐 溫80?1mL，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.5g，硫酸錳0.25g，蒸 餾水1000mL，pH值6.2～6.4；所述的MRS瓊脂培養(yǎng)基是在MRS液體培養(yǎng)基 加入1.8％瓊脂。

一種保藏號(hào)為CGMCC?No.3165的菌株的應(yīng)用，其特征在于：從斜面 挑取菌落接種于裝有A培養(yǎng)基的試管中，37℃靜置培養(yǎng)24小時(shí)，試管中 的接種量為10⁵cfu/ml。在相同培養(yǎng)基反復(fù)活化五次后；將最后活化后的菌 液接種到B培養(yǎng)基中37℃靜止培養(yǎng)4天，接種量為10⁶cfu/ml；將培養(yǎng)后 的菌液10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，取上清液，獲得高濃度酪胺液，高濃度酪 胺液的酪胺含量為4023.94μg/ml。

所述的A培養(yǎng)基為：0.1％酪氨酸的MRS液體培養(yǎng)基；所述的B培養(yǎng) 基為：0.005％磷酸吡哆醛+0.1％酪氨酸的MRS液體培養(yǎng)基。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：由于屎腸球菌(Enterococcus?faecium)xltyr002 產(chǎn)酪胺能力強(qiáng)，在培養(yǎng)液中，酪胺含量可達(dá)到4023.94μg/ml，用此方法生 產(chǎn)酪胺將極大降低生產(chǎn)成本和節(jié)約能源。

附圖說明

圖1是屎腸球菌在普通顯微鏡下的照片；

圖2是檢測(cè)屎腸球菌酪氨酸脫羧酶基因擴(kuò)增DNA片斷的電泳圖；

圖3是生物胺標(biāo)樣的高效液相色譜圖；

圖4是屎腸球菌培養(yǎng)液的高效液相色譜圖。

圖5是高效液相檢測(cè)酪胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

屎腸球菌(Enterococcus?faecium)xltyr002的篩選和保藏

培養(yǎng)基：

MRS液體培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，檸檬酸氫 二銨2g，葡萄糖20g，吐溫80?1mL，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂 0.5g，硫酸錳0.25g，蒸餾水1000mL，pH值6.2～6.4，115℃滅菌15min。

下層培養(yǎng)基為：蛋白胨5g，酵母膏5g，牛肉膏5g，氯化鈉2.5g，葡 萄糖0.5g，吐溫1g，硫酸鎂0.4g，硫酸錳0.03g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸 三銨2g，碳酸鈣0.1g，硫酸亞鐵0.04g，維生素B₁0.01g，磷酸吡哆醛0.05g， 瓊脂18克，酪氨酸5克，1000ml蒸餾水。pH?5.2，115℃高壓滅菌15分 鐘。

上層培養(yǎng)基為：溴甲酚紫0.06g，瓊脂20g，1000ml蒸餾水，pH5.2，121℃ 滅菌10min。

MRS固體培養(yǎng)基：在MRS液體培養(yǎng)基中加入1.8％瓊脂。

分離方法：