[發明專利]半乳糖的測定方法與半乳糖診斷/測定試劑盒

無效

• 申請號: 200910232029.1
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN102081090A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/78;C12Q1/54
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及醫學/食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及半乳糖診斷/測定方法及其試劑盒。?

【背景技術】

牛奶在營養界素有“液體黃金”的美稱，我國早在1992年由七部位聯合提出：“一杯牛奶強壯一個民族”的口號。奶類除不含纖維素外，幾乎含有人體所需要的各種營養素。牛奶中的乳糖進入人體后，經小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是嬰兒大腦發育的必需物質，與嬰兒大腦的迅速成長有密切關系。?

牛奶雖好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人體不能很好的消化吸收牛奶中的營養素，還會造成鈣、磷、鉀、鐵等元素的吸收障礙，影響嬰幼兒的體格和智力發育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨質疏松的重要原因。中國成年人飲用牛乳后乳糖吸收不良的發病率高達86.7％，不耐受指數為0.9。?

為了避免不適當飲奶對健康造成的損害，因此最好在飲奶前檢查自己是否耐受乳糖，在飲用牛奶后，測試尿液中半乳糖的濃度，這是目前國外最常用的一種方法，更為簡便、經濟、可靠。?

【發明內容】

[要解決的技術問題]?

本發明的目的是提供一種半乳糖的測定方法。?

本發明的另一個目的是提供一種半乳糖診斷/測定試劑盒。?

[技術方案]?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)?聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定半乳糖的方法。?

本發明半乳糖測定方法的技術原理是根據下述半乳糖激酶、丙酮酸激酶、丙氨酸脫氫酶的系列催化反應完成：?

半乳糖+腺苷三磷酸半乳糖激酶腺苷二磷酸+半乳糖1-磷酸?

腺苷二磷酸+烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸?

丙酮酸+氨+還原型輔酶丙氨酸脫氫酶丙氨酸+水+輔酶?

本發明的方法利用半乳糖激酶(galactokinase；EC?2.7.1.6)酶(偶)聯丙酮酸激酶(Pyruvate?Kinase；EC?2.7.1.40)、丙氨酸脫氫酶(alanine?dehydrogenase；EC?1.4.1.1)酶促反應終點法。半乳糖激酶酶解半乳糖反應產生腺苷二磷酸，再通過(偶)聯合丙酮酸激酶、丙氨酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度下降的程度，可以測算半乳糖的濃度大小。?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明涉及一種半乳糖的測定方法。該半乳糖測定方法的步驟如下：?

A、樣品準備：?

A.1標準樣品的制備?

將一定量的半乳糖溶于水或緩沖液中，再將半乳糖濃度調整到100微摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；

A.2待測樣品預處理?

待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其半乳糖濃度為0微摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、半乳糖激酶、丙酮酸激酶、丙氨酸脫氫酶、腺苷三磷酸、烯醇式丙酮酸與銨鹽，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?

C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45℃下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；?

D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；?

E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時間的變化；?

F、數據處理?