[發明專利]半乳糖的測定方法與半乳糖診斷/測定試劑盒

無效

• 申請號: 200910232005.6
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN102081083A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/31;G01N21/33;C12Q1/48;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及醫學/食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及半乳糖診斷/測定方法及其試劑盒。?

【背景技術】

牛奶在營養界素有“液體黃金”的美稱，我國早在1992年由七部位聯合提出：“一杯牛奶強壯一個民族”的口號。奶類除不含纖維素外，幾乎含有人體所需要的各種營養素。牛奶中的乳糖進入人體后，經小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是嬰兒大腦發育的必需物質，與嬰兒大腦的迅速成長有密切關系。?

牛奶雖好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人體不能很好的消化吸收牛奶中的營養素，還會造成鈣、磷、鉀、鐵等元素的吸收障礙，影響嬰幼兒的體格和智力發育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨質疏松的重要原因。中國成年人飲用牛乳后乳糖吸收不良的發病率高達86.7％，不耐受指數為0.9。?

為了避免不適當飲奶對健康造成的損害，因此最好在飲奶前檢查自己是否耐受乳糖，在飲用牛奶后，測試尿液中半乳糖的濃度，這是目前國外最常用的一種方法，更為簡便、經濟、可靠。?

【發明內容】

[要解決的技術問題]?

本發明的目的是提供一種半乳糖的測定方法。?

本發明的另一個目的是提供一種半乳糖診斷/測定試劑盒。?

[技術方案]?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)?聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定半乳糖的方法。?

本發明半乳糖測定方法的的技術原理是根據下述三個酶的系列催化反應完成：?

半乳糖+腺苷三磷酸半乳糖激酶腺苷二磷酸+半乳糖1-磷酸?

腺苷二磷酸+磷酰胺氨激酶腺苷三磷酸+氨?

氨+肌苷單磷酸+輔酶鳥苷單磷酸還原酶鳥苷單磷酸+還原性輔酶?

本發明的方法利用半乳糖激酶(galactokinase；EC?2.7.1.6)酶(偶)聯氨激酶(ammonia?kinase；EC?2.7.3.8)、鳥苷單磷酸還原酶(GMP?reductase；EC?1.7.1.7)酶促反應終點法。半乳糖激酶酶解半乳糖反應產生腺苷二磷酸，再通過(偶)聯合氨激酶、鳥苷單磷酸還原酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)氧還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算半乳糖的濃度大小。?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明涉及一種半乳糖的測定方法。該半乳糖測定方法的步驟如下：?

A、樣品準備：?

A.1標準樣品的制備?

將一定量的半乳糖溶于水或緩沖液中，再將半乳糖濃度調整到100微摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；

A.2待測樣品預處理?

待測液體樣品可以直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其半乳糖濃度為0微摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、鳥苷單磷酸還原酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與肌苷單磷酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?

C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45℃下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；?

D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；?

E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時間的變化；?

F、數據處理?