[發(fā)明專利]模擬人克隆氏病的小鼠結(jié)腸炎模型及其制備方法和用途

無效

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• 申請日: 2009-12-11
• 公開（公告）號: CN102090373A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發(fā)明（設計）人: 韓忠朝;梁璐;董春蘭;葛菁;陳小軍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院(血液學研究所)
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61M31/00
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

技術領域

本發(fā)明涉及動物模型領域，尤其是模擬人克隆氏病的小鼠結(jié)腸炎模型及其制備方法和用途。

背景技術

炎癥性腸病是一種常見的慢性胃腸道病，包括潰瘍性結(jié)腸炎和克隆氏結(jié)腸炎，其病因和確切的發(fā)病機理目前仍不清楚。目前普遍認為IBD的發(fā)病機制是由于遺傳缺陷和環(huán)境因素導致的遺傳易感宿主對腸道菌叢的免疫應答異常，以腸道炎癥為主要表現(xiàn)的慢性自身性免疫疾病。近年來，隨著人民群眾生活水平提高，這種傳統(tǒng)認為只在歐美有較高發(fā)病率的疾病，在亞洲地區(qū)的發(fā)病率正在逐步升高，其中難治性IBD也顯著增加。在有炎癥的腸道部位，腸的成肌纖維細胞被激活，并且上調(diào)一系列的細胞因子，化學趨化因子，生長因子以及黏附分子，增加促加炎癥的可溶性介質(zhì)和細胞外基質(zhì)因子的分泌。這與正常的腸道的反應是截然不同的，正常的腸道中的腸的成肌纖維細胞是靜止的，沒有活性的。IBD的發(fā)病機理可能是由于腸道菌叢和腸粘膜免疫系統(tǒng)的功能紊亂有關，T細胞的功能異常或者細胞因子失衡會導致腸粘膜免疫系統(tǒng)異常。在正常的腸道中，效應性免疫細胞和調(diào)節(jié)性免疫細胞通過復雜的細胞因子網(wǎng)絡相互調(diào)節(jié)而保持穩(wěn)定。而在有炎癥的腸道中，對腸粘膜系統(tǒng)的微生物菌叢中的無害抗原的過激的效應免疫反應或者缺乏調(diào)節(jié)性免疫反應會導致腸道粘膜炎癥，并使得腸道粘膜免疫系統(tǒng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)傾向于發(fā)生炎癥。

炎癥性腸病與自身免疫密切相關，T淋巴細胞作為免疫調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié)，CD4+T細胞在實驗性黏膜炎癥扮演了極其重要的角色。CD4+T細胞作為腸黏膜炎癥的主要效應細胞。效應性CD4+T細胞迅速分裂、增殖，形成致敏淋巴細胞，又可以活化粒細胞、增強NK細胞和LAK細胞的殺傷力，并誘導粘附分子表達及肥大細胞脫顆粒，以增進炎癥反應。根據(jù)產(chǎn)生細胞因子和生物功能的不同，傳統(tǒng)上將CD4+T細胞分為兩個亞群：Th1細胞和Th2細胞。CD4+T細胞在IL-12的作用下極化為Th1細胞，形成IFN-γ、TNF-α升高的Th1型炎癥；在IL-13的作用下極化為Th2細胞，出現(xiàn)IL-4、IL-5升高的Th2型炎癥。克隆氏結(jié)腸炎的特征是在胃腸道中產(chǎn)生透壁的肉芽腫性炎癥，炎癥部位通常是定位在回腸末端和升結(jié)腸，克隆氏結(jié)腸炎是一類Th1細胞極化為主導的疾病，幼稚T細胞在IL-12，IL-18或者IL-23的誘導下產(chǎn)生一系列的前炎癥細胞因子，其中包括IL-2和IFN-γ。IFN-γ可以促進內(nèi)皮細胞高表達黏附分子，從而促進炎癥細胞因子的募集和激活巨噬細胞。潰瘍性結(jié)腸炎與克隆氏結(jié)腸炎不同，它是由于表面的炎癥而導致內(nèi)皮細胞的破壞，即產(chǎn)生潰瘍，主要的受累部位是直腸和結(jié)腸。潰瘍性結(jié)腸炎是典型的Th2細胞極化為主導的疾病，Th2細胞主要產(chǎn)生IL-4，IL-5和IL-10等細胞因子。當自然殺傷T細胞激活后，大量分泌IL-13，從而介導炎癥反應，通過產(chǎn)生自由基和大量的前炎癥因子TNF-α，IL-1，IL-6，IL-8，IL-12和IL-18，從而產(chǎn)生一系列炎癥及聯(lián)反應。盡管這兩種疾病都是針對粘膜系統(tǒng)的抗原的異常免疫反應，但卻是通過截然不同的生理途徑導致疾病的。克隆氏結(jié)腸炎是在IL-12或者IL-23的誘導下，由Th1細胞介導的免疫功能異常，而潰瘍性結(jié)腸炎則是在激活的自然殺傷T細胞分泌的IL-13的作用下，由Th2細胞介導的免疫功能異常。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是：通過TNBS誘導成穩(wěn)定的結(jié)腸炎模型，并使其表現(xiàn)為類似于人克隆氏病的特征，對克隆氏病進行藥物篩選提供了研究基礎。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案是：一種模擬人克隆氏病的小鼠結(jié)腸炎模型的制備方法，包括以下步驟：

(1)通過直腸灌注法將TNBS注入小鼠體內(nèi)；(2)通過檢測小鼠的大體指征和臨床指標來判斷小鼠模型是否成功建立；(3)應用流式細胞術檢測小鼠脾細胞的T細胞亞群分布，以確立模型的免疫細胞變化。

所述檢測小鼠的大體指征是指：小鼠全結(jié)腸損傷、體重下降、精神倦怠、毛色失去光澤、腹瀉和便血。

所述進行臨床指標的檢測是指：腸組織取材及疾病評分、結(jié)腸組織病理學檢查，包括膜充血水腫，糜爛、壞死，多發(fā)潰瘍，潰瘍深入，部分潰瘍達漿膜層，壞死嚴重，腸腔狹窄，病變達小腸末端。

所述取小鼠脾細胞進行T細胞亞群分布檢查是指：TNBS誘導的急性腸炎表現(xiàn)為Th1型炎癥，Th1模型的炎癥特征在肉眼和光鏡水平下均和CD病相似。

一種模擬人克隆氏病的小鼠結(jié)腸炎模型，其特征在于，由上述的方法獲得。

一種模擬人克隆氏病的小鼠結(jié)腸炎模型，在篩選治療人克隆氏疾病的藥物中的應用。