[發(fā)明專利]對工業(yè)廢水中復合污染物具有降解能力的微生物菌株的培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910223758.0
• 申請日: 2009-11-19
• 公開（公告）號: CN101701190A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 李鈞敏
• 申請（專利權）人: 李鈞敏
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C02F3/34;C02F101/36;C02F101/38
• 代理公司: 臺州市方圓專利事務所 33107
• 代理人: 張向飛;張智平

技術領域

本發(fā)明涉及一種微生物菌株的培養(yǎng)方法，具體地說涉及一種對工業(yè)廢水中復合污染物具有降解能力的微生物菌株的培養(yǎng)方法；屬于生物技術領域。

背景技術

工業(yè)廢水污染是治理當前生態(tài)保護中一項非常重要和極具挑戰(zhàn)性的工作。來自印染、制藥、農(nóng)藥、制革、石油化工和食品工業(yè)等生產(chǎn)過程中的有機廢水成分復雜、可生化性差，嚴重污染水環(huán)境，甚至將削弱水生生物等的長期繁殖能力。現(xiàn)有的工業(yè)廢水的凈化處理技術可歸納為生物法、化學法、物理-化學耦合法和物化-生物耦合法等。其中生物法具有經(jīng)濟性好，無二次污染等優(yōu)點。

現(xiàn)有的工業(yè)廢水中對環(huán)境污染嚴重的主要有苯酚、苯胺和硝基苯類化合物等。其中苯酚是造紙、煉焦、煉油、塑料、紡織等工業(yè)廢水中的主要污染物。硝基苯類化合物廣泛應用于農(nóng)藥、染料、炸藥、橡膠以及其它化工產(chǎn)品的生產(chǎn)。環(huán)境中的硝基苯類污染物主要包括硝基苯、硝基氯苯、硝基甲苯、硝基苯酚、硝基苯胺等化合物。利用微生物降解苯酚、苯胺和硝基苯類化合物是一種既經(jīng)濟且不會產(chǎn)生二次污染的方法，近年來，從工業(yè)廢水污染的環(huán)境中分離到許多可以降解苯酚、苯胺和硝基苯類化合物的微生物菌株。盛連喜等人在應用生態(tài)學報，2007年7月，第18卷，第7期中對硝基苯類化合物微生物降解研究進展，并從硝基苯類化合物降解菌的馴化篩選，降解途徑、降解激勵、共代謝、趨化性和分子遺傳學角度，闡述了硝基苯類化合物生物降解的最近研究進展。溫洪宇等人在徐州師范大學學報(自然科學版)2003年12月，第21卷，第4期中敘述了降解苯酚細菌的分離及生理學特性研究，雖然它通過菌株培養(yǎng)、馴化與篩選從工業(yè)廢水中分離出兩株可以降解苯酚的細菌，但是該菌株僅僅對苯酚具有降解作用，對工業(yè)廢水中同時具有苯胺和硝基苯類化合物的復合污染物卻不具有降解能力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術存在的缺陷，提供一種對工業(yè)廢水中復合污染物具有降解能力的微生物菌株的培養(yǎng)方法。

本發(fā)明的目的是通過下列技術方案來實現(xiàn)的：一種對工業(yè)廢水中復合污染物具有降解能力的微生物菌株的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟：

A、針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類復合化合物，分別配制含不同濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要的其它化學基質(zhì)成分，將部分液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基；

B、將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20-40℃，培養(yǎng)時間為2-4天；

C、將假單胞菌株接種到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后將其制成感受態(tài)細胞，將步驟B中培養(yǎng)的菌株濃縮后與感受態(tài)細胞一起重懸于低濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基，在溫度為10-40℃的條件下孵育10-45小時；再采用不同濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫度為15-45℃，馴化培養(yǎng)時間6-25天，反復馴化培養(yǎng)2-12次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基，在溫度為10-40℃的條件下孵育10-45小時，然后進行鑒定；

D、將步驟C中獲得菌株進行純化后，即獲得對工業(yè)廢水中復合污染物具有降解能力的微生物菌株。

本發(fā)明首先根據(jù)工業(yè)廢水中的復合污染物種類，制成的不同濃度含復合污染物的液體培養(yǎng)基，然后對活性污泥微生物進行富集，再加入感受態(tài)的宿主菌重懸于低濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基進行孵育，采用不同濃度的廢水進行反復馴化，并選擇優(yōu)勢菌種，純化后最終得到對復合污染物具有降解能力的微生物菌種。

其中步驟A中配制不同濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基，主要配制目標化合物的濃度為0，0.5g/L，1.0g/L，1.5g/L，2.0g/L，2.5g/L，3.0g/L，3.5g/L。不同濃度梯度的工業(yè)廢水液體培養(yǎng)基可以統(tǒng)計出工業(yè)廢水降解微生物菌株隨復合污染物濃度變化的生長變化情況以及對復合污染物的降解率；微生物菌種生長所需要的其它化學基質(zhì)成分主要有磷、鐵、鉀、氧、鈉、氯、鈣、鎂等元素。將部分液體培養(yǎng)基添加15-20g瓊脂(按1000ml水計算)后就轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基。

步驟B中采用的是常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配方為牛肉膏3克，蛋白胨10克，氯化鈉5克，瓊脂15克，水1000ml。

步驟C中的假單胞菌株(Pseudomonas)主要是惡臭假單胞菌株，將它接種到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后把細胞懸浮在pH6.0的100mmol/L?CaCl₂中，在冰浴條件下，放置過夜，讓其轉(zhuǎn)化成感受態(tài)細胞。