[發明專利]測定竹紅菌甲素含量的高效液相色譜方法

有效

• 申請號: 200910218284.0
• 申請日: 2009-12-07
• 公開（公告）號: CN101710070A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: 鄭立雄;張慧穎;李俊;饒高雄
• 申請（專利權）人: 昆明振華制藥廠有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N30/02
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司 53100
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，具體是一種測定竹紅菌甲素(Hypocrellin?A)含量的高效液相色譜(HPLC)方法。

背景技術

光動力療法(Photodynamic?Therapy，PDT)是一種新型臨床治療技術，其發展始于20世紀70年代用于腫瘤的臨床診斷和治療研究，隨著對其作用機制的深入了解，在90年代開始用于治療鮮紅斑痣、微血管類疾病、視網膜黃斑變性等。從1993年加拿大首先批準光敏藥物Photofrin應用于膀胱癌和食管癌的光動力治療以來，光動力療法在很多國家獲得批準，眾多病人受益于光動力療法。

作為一種新型療法，PDT是將光敏劑導入體內并讓它在組織間分布，然后用與光敏劑吸收光譜相匹配的光照射靶組織，在氧的參與下產生對靶組織的破壞。PDT的關鍵在于光敏活性化合物的獲得以及光的參與，并因而獲得雙重選擇性，也因選擇性的獲得而在臨床治療上具有高效性和安全性。

竹紅菌甲素(Hypocrellin?A，HA)是從云南民族藥竹紅菌(竹生小肉座菌Hypocrellabambusae的干燥子座]中首先發現的一種苝醌類新型天然光敏劑，其化學結構如附圖1所示(萬象義等，一種新的光化學療法藥物--竹紅菌甲素，科學通報，1980年第24期，1148頁；Tadashi?Kish?et?al，New?Perylenequinones?from?Shiraia?bambusicola，Planta?Med，1991年，第57卷，376頁)。

HA的光敏活性具有光毒性高、暗毒性低、易排泄等優點，以其為主要有效成分開發的民族藥制劑竹紅菌軟膏，在臨床上已用來治療外陰白色病變、軟化疤痕疙瘩、鮮紅斑痣等，是一種具有發展前景的新型光療藥物(徐尚杰等，新型光動力藥物--竹紅菌素衍生物的研究與進展，科學通報，2003年第10期，1005頁；魏玉德，竹紅菌素研究的進展，中國實用醫藥，2008年第3期，147頁)。

有關HA定量分析的研究，主要有：

(1)分光光度法：利用HA在紫外-可見光區具有吸收的性質，以測定其吸光值來定量。因發色團相似的化合物均具有類似吸收曲線，該方法容易受雜質，尤其是同類物質的干擾，專屬性差，已不適應藥物分析的實際需求。

(2)高效液相色譜法：利用色譜柱先將HA和其它成分分離，再利用其理化性質檢測含量，是目前主流的分析技術，有以下的報道：

①發明專利“高效液相色譜法測定竹紅菌甲素含量的方法”(專利號ZL200410065986.7)和論文“高效液相色譜熒光檢測法測定竹紅菌中竹紅菌甲素的含量”(顧曉天等，藥物分析雜志，2006年，第1期，68頁)用甲醇-水＝83∶17為流動相分離，以熒光發射性質檢測進行定量分析。

②論文“HPLC法測定光療藥物竹紅菌乙素的含量”(安紅波等，黑龍江八一農墾大學學報，2009年，第3期，70頁)用甲醇-水＝83∶17為流動相，在300nm處檢測紫外吸收進行定量分析。

③論文“竹紅菌中竹紅菌乙素的提取及其含量的測定”(周林，南京師范大學學報，2007年，第2期，122頁)用乙腈-KH₂PO₄(0.02mmol/L)＝70∶30為為流動相，在300nm處檢測紫外吸收進行定量分析。

但經過本發明人系統的研究，結果表明上述專利或論文所確定的主要技術條件有嚴重缺陷，在實際的生產應用中，存在這以下弊端：

(1)所選用的流動相甲醇-水＝83∶17，或者乙腈-KH₂PO₄(0.02mmol/L)＝70∶30，均不能很好分離樣品中HA，圖譜中HA峰傾斜，對稱度達不到《中國藥典》2005年版一部附錄VI?D對于HPLC分析拖尾因子在0.95～1.05之間的要求。

(2)上述方法①采用的熒光檢測器，為不常用儀器，適用面窄。方法①中專利技術只選用雙封端保證很低硅羥基活性的Zorbax?Extend?C18柱，適用面窄，且此類色譜柱一般價格較高，增加了分析成本。

(3)上述方法②、③采用在300nm處檢測紫外吸收，而HA的紫外-可見吸收曲線(如附圖2所示)在300nm不是吸收峰，不適宜用作定量分析的檢測波長。

為尋求對于HA更科學合理，更具有適用性的藥物分析方法，本發明人經過系統的對比研究，提供了一種不同于上述專利或論文所公布的，可用于測定中藥材或者其制劑產品中HA含量的HPLC方法。

發明內容