[發(fā)明專利]竹抗寒性鑒定與評價(jià)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910216387.3
• 申請日: 2009-11-27
• 公開（公告）號: CN101852757A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡尚連;陳珂;曹穎;任鵬;盧學(xué)琴;段寧
• 申請（專利權(quán)）人: 胡尚連
• 主分類號: G01N27/06
• 分類號: G01N27/06;G01N21/78;G01N1/30;C12Q1/26;C12Q1/28
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• 代理人: 暫無信息

1.竹抗寒性鑒定與評價(jià)的方法，其特征在于包括以下步驟：

a)取同一竹齡且生長一致的30cm枝條為材料，洗凈擦干，石蠟封口，在低溫條件下處理12h，以未經(jīng)處理的枝條為對照；

b)將處理后的一部分葉片于液氮中速凍30min后保存于-80℃冰箱，另一部分葉片用于電導(dǎo)率分析，每個(gè)樣品設(shè)置3次重復(fù)，測定處理后不同竹種的電導(dǎo)率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性；

c)按照灰色系統(tǒng)理論，以不同竹種的生理生化指標(biāo)及其抗寒隸屬函數(shù)均值為數(shù)據(jù)集合，建立灰色系統(tǒng)，根據(jù)關(guān)聯(lián)分析公理計(jì)算各生理生化指標(biāo)與抗寒隸屬函數(shù)均值間關(guān)聯(lián)系數(shù)，并據(jù)此對不同生理生化指標(biāo)對竹抗寒性的作用進(jìn)行排序。

其中隸屬函數(shù)值的計(jì)算方法如下：

Xij′=Xij-XiminXimax-Ximin---(1)]]>Xij′=1-Xij-XiminXimax-Ximin---(2)]]>

X‾ij′=1nΣj=1nXij′---(3)]]>

上式中X′_ij表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的抗寒隸屬函數(shù)值；X_ij表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的測定值；X_imax和X_imin分別代表相應(yīng)指標(biāo)的最大和最小測定值；表示竹種的抗寒隸屬函數(shù)均值；n為指標(biāo)數(shù)，凡指標(biāo)與抗寒性正相關(guān)則按公式(1)計(jì)算，反之按公式(2)計(jì)算。

d)采用主成分分析的方法，對與竹子抗寒性密切相關(guān)的生理生化指標(biāo)，可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性，利用SPSS17軟件進(jìn)行主成分分析，得到抗寒性評價(jià)的4個(gè)主成分后，即第一主成分為丙二醛和可溶性蛋白含量；第二主成分為POD活性和脯氨酸含量；第三主成分為可溶性糖；第四主成分為SOD活性。通過計(jì)算主成分與相應(yīng)的方差貢獻(xiàn)率乘積之和得到植株抗寒性的綜合評價(jià)，評價(jià)得分方法表示如下：

F＝0.3345F₁+0.1948F₂+0.1129F₃+0.1011F₄。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹抗寒性鑒定與評價(jià)的方法，其特征在于：

a)電導(dǎo)率的測定取生長一致的竹葉葉片，用自來水輕輕沖洗除去表面站污物，用蒸餾水漂洗1-2次，再用重蒸水沖洗1-2次，用紙巾輕輕吸干葉片表面水分，避開葉脈，用打孔器打取等量圓片，混勻后稱取0.5g，設(shè)置三次重復(fù)，分別放入裝有20m1重蒸水的試管中，浸沒樣品，用真空泵抽真空10min，25℃、150r·min^-1震蕩12h，用電導(dǎo)儀(EUTECH?Con51型)測定浸泡液電導(dǎo)率R，再加上試管塞，在水浴鍋煮沸10min，將組織全部殺死，冷卻至室溫后在同樣條件下測定溶液的電導(dǎo)率R1，計(jì)算出電解質(zhì)滲出率來表示該樣品經(jīng)低溫處理后細(xì)胞質(zhì)膜的透性。相對電導(dǎo)率＝R/R1x100％。

b)可溶性糖含量的測定：采用蒽酮比色法。

c)可溶性蛋白含量的測定：采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法。

d)丙二醛(MDA)的測定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法。

e)脯氨酸的測定：采用酸性茚三酮法。

f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定：采用氮藍(lán)四唑(NBT)還原法。

g)過氧化物酶(POD)活性的測定：采用愈創(chuàng)木酚法。