[發明專利]一種大環糊精的制備方法

無效

• 申請號: 200910213171.1
• 申請日: 2009-10-19
• 公開（公告）號: CN101696441A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發明（設計）人: 王金鵬;徐學明;金征宇;謝正軍;田耀旗
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/04
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

一種大環糊精的制備方法，屬于食品工業技術領域。

背景技術

大環糊精具有復雜的空腔結構，并且大環糊精的疏水內腔具有一定的柔性， 可以隨著客體分子的形狀發生相應的變化，對不同大小的客體分子具有不同的 俘獲能力。此外，大環糊精具有高度的水溶性、低黏度和不回生等特性，因此 可以用做食品中不良雜味的去除，作為食品添加劑用于抗回生，或者用于藥物 載體等等，具有巨大的應用前景?？梢灶A見大環糊精將具有巨大的經濟價值。 本發明為實現大環糊精的大規模工業化生產奠定了很好的基礎。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大環糊精的制備方法。

本發明的技術方案：一種制備大環糊精的方法，以土豆直鏈淀粉為底物， 經4-α-糖基轉移酶作用、復合酶綜合處理得到聚合度范圍為18-55的大環糊精， 步驟為：

1)土豆直鏈淀粉的提?。悍Q取10.0g土豆淀粉，加入少量無水乙醇浸潤， 加入370mL的0.5mol/L氫氧化鈉溶液，并置于沸水中加熱30min左右，溶液分 散均勻后冷卻。低速離心除去不溶物，用2mol/L的鹽酸調節pH至中性。加入 200mL體積比為3∶1的正丁醇-異戊醇的混合液，在沸水中水浴20-30min，使溶 液清澈透明，無結團狀。冷卻至室溫。于2-4℃的冰箱中放置24h，取出，進行 以下操作：以6000轉/min的離心力下高速離心20min。將上述沉淀物全部轉移 至120mL的正丁醇與水的體積比為1∶9的正丁醇水溶液中，然后置于沸水浴中 攪拌直至溶液分散透明，再逐漸冷卻至室溫，放入2-4℃的冰箱中24h，取出， 離心，將得到的沉淀物重復所述操作共3次后，用無水乙醇浸泡5-6次，并于室 溫下真空干燥得到土豆直鏈淀粉。

2)大環糊精的制備：稱取土豆直鏈淀粉4g，加入90％的二甲亞砜100mL， 沸水浴中加熱使其溶解；向該淀粉體系中加入30mL?Tris-HCL緩沖溶液(pH?7.5， 0.05mol/L)，并調節溶液pH為7.5；加入4-α-糖基轉移酶純酶液4mL(40 U/mL)，于75℃下反應8h，沸水浴中加熱20min終止反應；4℃、10000轉/min 離心10min后收集反應液，向反應液中加入β-淀粉酶(30U/g淀粉)去除未反 應的直鏈淀粉，30℃反應4h后沸水浴加熱10min終止反應；離心去除沉淀后 再加入糖化酶(100U/mL)和脫支酶(30U/mL)各2mL，50℃反應6h后沸水 浴加熱10min終止反應，4℃、10000轉/min離心10min后收集上清，加入無 水乙醇使得乙醇質量濃度達到60％，10000轉/min離心10min收集沉淀，將沉 淀凍干即得經過初步純化的大環糊精。

3)產物的鑒定：用高效陰離子色譜(HPAEC)對大環糊精樣品進行了鑒定， 操作如下：

稱取0.01g大環糊精樣品，用超純水溶解至1mL制成10mg/mL的樣品溶液， 上樣10μL，采用的色譜條件是：Carbo?PacTM?PA-200column(3*250mm)；柱溫 為30℃；流速為0.5mL/min；檢測器采用電化學檢測器；洗脫條件采用醋酸鈉 梯度洗脫法，程序如下：0-5min醋酸鈉濃度達到70m?mol/L，氫氧化鈉濃度達 到96.5m?mol/L，5-45min醋酸鈉濃度達到320m?mol/L，氫氧化鈉濃度達到72.5 m?mol/L。在此梯度洗脫程序下，大環糊精得到有效分離，經與標準大環糊精進 行對比，制備得到大環糊精的聚合度范圍為18-55之間。

本發明的有益效果：本發明方法首次實現了大環糊精的制備，并且對其進 行了初步的純化及鑒定。大環糊精獨特的包埋特性使得其具有巨大的應用前景， 本發明為實現大環糊精工業化生產提供了技術支持。

附圖說明

圖1樣品大環糊精的高效陰離子色譜圖。

具體實施方式

實施例1